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标题:
询问大家关于细胞消化的问题
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作者:
小小龙001
时间:
2015-12-12 10:36
标题:
询问大家关于细胞消化的问题
最近有一次消化MSC，在消化过程中出现絮状物， 而且经过吹打也无法吹散，想问一下大家是什么问题，用的0.125%的胰酶消化到2分多钟的时候出现的
作者:
2013sp
时间:
2015-12-12 10:43
是不是你的细胞密度太大，已经分化了，形成了团块？MSC是比较容易被消化的，可以用0.25%的胰酶，放在37℃培养箱一分钟，然后拿出来在显微镜下观察。MSC很容易消化过，要注意观察。
( A, z* z! d3 q% V. B2 w
作者:
yeshch
时间:
2015-12-12 13:48
有可能是消化过了，DNA等从细胞溢出导致粘连，此时越吹越粘，建议消化时间短一些看看
作者:
zxd962735279
时间:
2015-12-12 15:20
楼上说i的有道理，还有一点就是细胞密度很大，细胞过后很容易聚团
作者:
小精卫
时间:
2015-12-12 23:38
是不是没分离干净
作者:
angel-niu
时间:
2015-12-13 16:50
1.请问楼主的胰酶含不含EDTA？如果胰酶含有EDTA，消化能力会很强，加上细胞密度过大，很可能会形成团块，里面还好含有一些细胞间胶原，所以很难吹打开。
) I; e0 R' B. \) J9 }
2.楼主多长时间换液，细胞状态如何？用PBS冲洗了没，在换液前？如果长时间不换液，会出现此种情况，细胞代谢物加上污染可能。
作者:
woshibotao_01
时间:
2015-12-13 23:18
絮状物，很可能是你细胞长的太密了，脱落的死细胞，凝结成的，不容易吹散。
作者:
小小龙001
时间:
2015-12-14 09:32
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2013sp
的帖子
, A7 U. q) t- R; D
* N% H, l$ B" ?
4倍镜下看大概融合率在85左右，而且细胞形态挺正常的，是不是胰酶的问题？
作者:
小小龙001
时间:
2015-12-14 09:33
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yeshch
的帖子
. t- V) B* \. j: p5 j( u3 m4 X
7 n3 i' T' w f1 Z, ^) V
之前就是这样消化的，一点问题没有，这是第一次出现这种情况
作者:
小小龙001
时间:
2015-12-14 09:34
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zxd962735279
的帖子
1 Q0 [" U% z0 c J, m
7 Z- ~: m2 b( x2 p& W
用的175的瓶子，种瓶密度大概在1×10的6次方左右
作者:
小小龙001
时间:
2015-12-14 09:34
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zxd962735279
的帖子
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5 J3 e! N5 k W0 v1 Q/ b# V5 u
用的175的瓶子，种瓶密度大概在1×10的6次方左右
作者:
小小龙001
时间:
2015-12-14 09:35
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小精卫
的帖子
) F2 V' `4 p7 U% a* X' ?4 O6 |" ~
7 L& L; K/ @& }. v& M" X `$ y9 v- C
什么意思，没听明白
作者:
小小龙001
时间:
2015-12-14 09:38
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angel-niu
的帖子
# D2 ~8 Y% K H E$ e( M* O
% c% U7 H- K* i/ G% F9 T4 J
我们这里用的胰酶不加EDTA的，而且这是第二代，会不会是细胞的代数也有关系，4倍镜下看大概融合率在85左右
作者:
genhaoxin
时间:
2015-12-14 16:07
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小小龙001
的帖子
8 M& A) E! y/ c. b o) P" J: x
2 i- i& a( ^+ t- Y {7 Y
接种密度不大，如果长到85%，估计需要的时间超过3天了，细胞消化后絮状可能是细胞老化所致
作者:
121qwq
时间:
2015-12-15 09:16
楼主的0.125是用0.25稀释的吧？我可以告诉你，稀释效果不好，最好直接用0.25的胰酶消化
作者:
lgfffancy
时间:
2015-12-15 09:23
我养过MSC，你这个现象很常见，出现絮状物那肯定是细胞长得过密了，你没有及时传代；第二你用的胰酶可以改用0.25%的，消化一分钟之后，拿出来拍拍flask，这样利于细胞生长，不至于消化过久影响干性；第三听你的描述应该有3分钟，3分钟确实有点久了，一定要用medium使劲吹打，吹成单细胞悬液；但是我不赞成什么胶原粘连的问题，因为你没有coating，明胶之类的物质。记住两点：消化时间以及生长密度。
作者:
lijie_suc
时间:
2015-12-16 10:10
如果之前一直这样，会不会是胰酶反复冻融效果降低，细胞密度太大，出现的细胞团块？
作者:
zsykdx
时间:
2015-12-17 09:54
我是用0.25的胰蛋白酶消化，在显微镜下关注消化进度，大约有20%细胞漂了就吸弃胰蛋白酶，用完全培养基终止后吹洗细胞。
作者:
游遍芳丛pine
时间:
2015-12-23 11:40
我也遇到过 总结了下应该是：
1 \3 B Y; C* z
1、细胞密度过大了；
/ Z/ ~8 h' q5 f6 ?, i* q2 V+ n" B# |
2、该批细胞状态不佳。希望能有帮助
作者:
木头1102
时间:
2015-12-25 10:16
我觉得应该是细胞密度大了；然后，我消化一般是0.05%的胰酶37度培养箱两分钟，镜下观察细胞收缩变圆少部分飘起来就加培养液终止消化；额，我觉得，如果是传代的话，有絮状物最好过滤下
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