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标题:
细胞制备操作SOP
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作者:
guanjun1314
时间:
2015-12-17 08:53
标题:
细胞制备操作SOP
哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！
作者:
plum
时间:
2015-12-17 10:15
本帖最后由 细胞海洋 于 2015-12-17 12:27 编辑
1 o3 _9 Y% y( }! f9 R3 M
z) s, C8 k, H7 l' U
这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民
作者:
yooung
时间:
2015-12-17 10:54
本帖最后由 细胞海洋 于 2015-12-17 12:27 编辑
) C2 h* l' N6 P$ U! F
+ J$ a: s' Y; Y4 S# q8 O& F9 I9 C
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guanjun1314
的帖子
6 [/ s5 M) F% p1 J" q
$ D3 b$ N4 ]& t
细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
- q7 s) B! M9 ]7 o
另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。
1 B# f/ v- c& {/ y( y
作者:
guanjun1314
时间:
2015-12-18 09:48
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yooung
的帖子
g. Z$ O" l% d0 q) ^( Q
0 R8 O2 j% m Z- u
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有
作者:
yooung
时间:
2015-12-18 11:18
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guanjun1314
的帖子
$ J1 y7 |2 ^+ e* [, C. N( M0 S/ v* \
. f& v! @& L* P+ s8 d$ K$ s1 \3 J1 E
以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。
作者:
guanjun1314
时间:
2015-12-18 15:01
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yooung
的帖子
* u7 N( D- x8 P" b
9 P0 O9 o$ V# c# E
嗯，建议得好，采纳
作者:
guanjun1314
时间:
2015-12-21 08:49
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plum
的帖子
* i9 n6 q2 D( d
6 n' ~; t2 B+ l/ b0 E, _9 R: x
非常感谢
作者:
海南小石
时间:
2015-12-21 16:29
本帖最后由 细胞海洋 于 2015-12-22 12:26 编辑
: w7 B7 l4 `, C/ M8 d% R6 u4 L' i
6 Q) a' y7 I6 O. P+ s
有一个相关的，希望对你有帮助
. b% a7 d; z w- g
一、目的
/ \4 ?. F% O3 k( o6 Z
+ W- z! Y( T$ L6 X
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
% q" @# D- y2 Z
/ P1 k7 B9 h7 a
二、适用范围
p/ \& F$ g# h; H
7 J# \) i( H( f
适用于疾控中心所有技术人员 。
/ C2 ^9 D( d4 e2 W: X; B
! D# }) e& {9 Z$ h7 f
三、程序
& Z b' t! _) v# g* L8 u. F
% v& `' K: u3 k1 _2 ?8 ~$ E, D
（一）生物安全要求
Q/ l; C% B6 E! k) Z H
\4 Z7 g$ {! K
实验室生物安全级别：BSL-1
: S W) s+ T7 Q3 I( K( i
" B- S; }0 _9 y# @& C
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。
" a2 w7 r1 e) n3 O: r% ]4 e6 }
& A" H" p! Q. m( }2 k t
（二）材料
9 C, F2 r8 I! q* ?9 q5 C
4 g1 ]1 u9 U' i1 \' {
1. 生长成片的MDCK细胞
! D) ^/ ~2 |# y
* I5 P% l" @# ^" j; e k
2. 无菌的T25细胞培养瓶
; M' g! e& s/ p9 c; M- u/ D6 C6 U3 a
$ j6 u- a9 `" X/ M' C- c
3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）
8 y( w# {' I$ q3 g# T5 }
# v; O0 x/ U W7 j6 r
4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃
# U$ b; ]7 P0 A
+ w: x1 d- H) a8 s& T
5. HEPES缓冲液，1M母液
# a# p8 E* |- k) I$ [- n( m7 P
, t7 U0 m- _$ ?6 E3 t9 r
6. 胎牛血清
; k% ]9 C* q& {/ ?2 x% q
$ v, F1 ^' C+ s8 }& d+ j
7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃
. k* Z& j% _9 N! {
. ]" n5 m8 \: F: r
8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
- r+ _( q1 ~$ a% `
+ [8 W9 j6 a A1 n3 n
9. 1mL、10mL无菌移液管
6 t' }4 g3 O1 x" u" D
; r6 s( ?6 }+ R" ]
10. 70％～75％的酒精
# K1 Z% D+ e/ l0 G8 b- p; v
. @, v( V U+ A/ ^8 V. Q
注意事项：经常检查试剂使用的有效期。
G( ^$ b5 t& H6 D
" x0 e: l+ J; S1 `4 Z, n
（三）实验步骤
) g V! E# M7 c1 n1 Z
% \5 b j) K! ]3 N6 F+ O8 f0 Q3 ?2 F2 v. o
这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。
" L5 S; W% |' c6 H4 _
, {7 H4 s+ W+ F N. ]+ r3 g2 l
1. D-MEM培养液的准备
; R B! D7 V, ?/ j, N2 q! M
/ O; k. _. [* J+ R
500mL D-MEM液中加入：
) G6 v: N' j! f# y0 M0 Q
( {) m; g" l5 W) T& h) u
青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），
! C: R5 @3 z# @ I% A0 T$ X
% C0 g- b: d9 P* ]( q0 G
HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。
3 Z+ Z" \3 a# Y; j* O
/ R" A/ n( S1 ~7 q( q
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL
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+ E4 ?' i' Z1 T. @" G
2. 细胞生长液的准备
! Z T- B7 _! ]4 b
- k7 P. J" C$ L# v
胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。
2 M* W' [% H, _ E
3 i9 r- u! e( X7 M
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。
: b* X* ]6 E: W4 q: ^
, G2 y0 v. N8 w$ V
4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。
" V1 v! K# ]+ C4 l3 n! f
1 g# m) \& Y- g, x F! K
5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
: y3 J8 R' i' ]0 m) s
% c7 L( ^, @1 m
6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。
) U# }+ }6 X3 V- P, `
4 j1 O4 t- _1 _! @
7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。
+ E) b& D* [' Z/ y+ G; O
$ C0 d3 J! d" d4 X0 G# ]3 H: j" a8 \
8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）
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3 S$ u6 f) @% S* V' F! H
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。
* M. _7 V8 E* `. t7 s+ z& I, y9 b
6 A2 r/ \: J1 T7 b0 F; B
10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。
O- ?$ H/ G7 |- e- @5 k
作者:
xiaoxiaodeji
时间:
2015-12-24 09:05
制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件
作者:
gyjjsw11333
时间:
2015-12-24 09:09
为什么下载不了呢
作者:
细胞海洋
时间:
2015-12-24 11:29
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gyjjsw11333
的帖子
" Z" ]3 R1 ?( z9 a/ `5 l
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