干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 脐带间充质干细胞分离 [打印本页]

作者: jddakui 时间: 2015-12-30 10:43 标题: 脐带间充质干细胞分离

脐带间充质干细胞分离消化，华通胶用1型酶到底对细胞损伤有多大？2个小时消化剩余组织块不多，但是也没分离出多少细胞啊？求解

作者: 木头1102 时间: 2015-12-30 10:56

组织量多少？胶原酶的浓度？消化之后你怎么处理的？

作者: jddakui 时间: 2015-12-30 10:59

回复木头1102 的帖子" b8 q! V/ N2 S$ l5 P

5ml组织块 1mm 0,1%胶原酶1 消化后+20ml培养基100目过滤 1500 离心10min 5ml重悬没看见什么细胞啊2 x$ T2 @6 u! m' b
求指导谢谢# M: Z6 Q0 q! q2 y. H% d

作者: 木头1102 时间: 2015-12-30 11:16

回复 jddakui 的帖子
7 \; v3 N @0 `! O
1500？是转速还是离心力？我消化后是10倍的PBS稀释，100目过滤，2500rpm（约800g）离心15min，PBS重悬，1500rpm离心5min，培养液重悬后接种。一般会有许多残渣悬浮在培养液里，但也可见细胞（发亮的圆点）。我觉得你可以先培养这看看，过五六天在观察下有没有细胞贴壁。

作者: jddakui 时间: 2015-12-30 12:59

回复木头1102 的帖子6 H. c+ {) u5 ^, y

1500rpm ，就是重悬看不见多少亮的圆细胞倒是瓶底很多小黑点点调节显微镜黑点会变亮。脐带干细胞悬浮时跟脂肪的应该差不多吧

作者: fjq729587158 时间: 2015-12-30 13:10

你可以试一下0.01%II型胶原酶，细胞量还可以。

作者: yaolinzhang 时间: 2015-12-30 14:01

回复 jddakui 的帖子

用sigma的collagenaseA 1mg/ml试试，建议37°水浴消化2h，每15min震荡一次

作者: 游遍芳丛pine 时间: 2015-12-30 14:09

可以试试组织贴壁法培养，细胞纯度较高，状态也会好些，不过时间相对较长。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)