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标题: 间充质干细胞的慢病毒转染效率问题 [打印本页]

作者: liqiang8589 时间: 2016-1-6 09:10 标题: 间充质干细胞的慢病毒转染效率问题

最近想用慢病毒过表达干细胞。在293包病毒的时候效率高，但是把病毒转染到干细胞的时候，却效率很低。有哪位大神可以告诉我干细胞转染的时候注意事项或特别用的试剂。我用的是 polybrene (8ug/ml) 转染试剂。7 ^( K2 L; q! A5 ~1 D, C

作者: yaolinzhang 时间: 2016-1-6 14:42

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需要注意的地方：1.细胞状态需要好；2.细胞接种密度，不能过密，50-60%即可；3.病毒滴度，慢病毒感染间充质的MOI大概在50左右，所以病毒滴度一定要高，这很重要；4.polybrene对细胞有毒性，注意用量

作者: ljzmy82 时间: 2016-1-6 16:28

可以二次转染一下，效果就好很多

作者: lgfffancy 时间: 2016-1-6 18:50

首先，可以肯定的是ploybrene的用量是没有问题的，我们实验室都是用的这个浓度，是没有问题的，所以可以排除polybrene的影响。其次有两个很重要的问题就是，细胞状态、密度，病毒滴度，这三个因素应该都好控制；不用灰心多试几次，一定能够成功的。

作者: liqiang8589 时间: 2016-1-13 22:58

回复 yaolinzhang 的帖子6 {; o$ J7 k- t" M
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我用293FT 细胞来做对照组 3 t9 T" R$ | r2 T0 ]0 J
293有50%有表达GFP，但是间充质干细胞一个都没有表达。

作者: liqiang8589 时间: 2016-1-13 23:00

有的论文有慢病毒转染之后用离心来提高效率，这个方法有用吗？？

作者: yaolinzhang 时间: 2016-1-14 08:51

回复 liqiang8589 的帖子7 N. Q2 v1 K7 W- Q$ W% _/ W( O
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293很好感染的，但MSC就没那么容易了，估计你的病毒滴度不够，慢病毒的实验滴度很重要

作者: liqiang8589 时间: 2016-1-14 12:28

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谢谢老师7 y* I' T3 e! h8 U+ ^9 `
除了超高速离心慢病毒外有好一点的浓缩试剂盒吗？？

作者: yaolinzhang 时间: 2016-1-15 17:22

回复 liqiang8589 的帖子4 o E/ _; x5 n+ q( r' r

你可以去Hyclone网站上试试，不过这方面我倒没用过，建议还是买进口的

作者: haibara007007 时间: 2016-1-19 14:41

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一定要注意病毒滴度啊，用浓缩柱浓缩一下，要不转染会很费劲

作者: firstaider 时间: 2016-2-3 15:20

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病毒滴度一定要高，多次感染或者直接用浓缩试剂盒吧

作者: yeshch 时间: 2018-1-29 10:33

回复 liqiang8589 的帖子# p; a1 j& ?+ J

我也遇到了类似的情况，第二次采用了二次感染的方法成功了；但是感染之后的细胞几乎不生长不知道怎么回事啊？请问你现在做的怎样啊？方便交流一下吗？9、8、5、3、4、0、2、6、2

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