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标题: 用培养瓶培养CIK细胞的有关装液量的事儿 [打印本页]

作者: 锋12 时间: 2016-1-13 15:17 标题: 用培养瓶培养CIK细胞的有关装液量的事儿

corning的T175的培养瓶，瓶子显示最大装液量为250ml，用其来培养cik细胞，当细胞悬液达到一定体积后就要及时转瓶。请教一下各位一般装液量达到多少体积才需要转瓶，通常该瓶子保持多少体积对于CIK细胞快速增殖最合适，前期少装些后期多装些？谢谢！

作者: 小猫狸狸 时间: 2016-1-13 15:38

对于细胞增殖来讲，需维持合适的细胞增殖密度（我们是5*10的5次方到1*10的6次方左右），根据细胞密度调整装液量；一般总体积200ml就可以转瓶了

作者: saberche 时间: 2016-1-13 15:45

其实并不是悬液达到一定体积后就要及时转瓶，需不需要转瓶或者入袋要看你的细胞密度，比如说装了250ml，细胞密度是2.0*10^6/ml，而你所需的细胞密度是1.0*10^6/ml，那你就需要再扩一个瓶。一般情况下7天之后细胞扩增速度会很快，这时就可以入袋了，当然也可以继续按照细胞密度扩瓶。细胞增殖速度跟细胞密度关系密切，密度大了小了都不利于细胞增殖，所以在培养过程中一定要控制好细胞密度。

作者: 锋12 时间: 2016-1-13 15:58

密度方面我这边大概保持在1*10的6次方左右，前期大约装量50ml就开始转瓶，后期保持装量在100~150ml左右

作者: saberche 时间: 2016-1-13 16:08

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在细胞密度符合的前提下装液量提高到200ml是没问题的，我们一般是接种时细胞密度高一些，细胞长起来后，在调低

作者: 木头1102 时间: 2016-1-13 17:21

我们60ml左右的外周血分离的单核细胞，50ml培养液重悬接入T175瓶子，后面视细胞量补液50ml至总量100ml，再次补液100ml至总量200ml，之后分瓶。细胞长起来后转袋。

作者: king8 时间: 2016-1-13 17:41

根据扩增情况吧，我们一般前期是50-100ml，后期增至150-200ml，少数可以达到250ml。# h. h4 D/ y+ X
主要是根据细胞密度扩瓶，因为细胞增殖速度跟细胞密度关系密切，密度过高或者过低都不利于细胞的增殖，所以在培养过程中一定要控制好细胞密度。

作者: 飞翔的烨 时间: 2016-1-13 18:02

细胞增殖的速度固然与种植密度有关，但个人认为，和是否加血清或血浆正相关，那长的速度不是一个数量级的。

作者: 小刘 时间: 2016-1-14 12:57

我们用的75的，每瓶装到60ml，及时传代，5天就是两个60转袋到1.8L培养袋中使其增殖

作者: 小馬 时间: 2016-1-18 13:57

这个不是看体积，应该是看密度。我们用75的，，后期转袋

作者: 锋12 时间: 2016-1-20 17:24

各位关于培养瓶中cik细胞悬液的密度如何计算，取出部分悬液后用（手工的计数板、自动的计数仪)检测其密度？有啥好办法不妨介绍一下，感谢。5 M) d. ~4 v9 Z, Q4 k# ^
一、另外，细胞长势好会出现很多集落和单个细胞的，仅仅是将瓶子晃动一下就取样检测我觉得不能准确反映出其真实的密度。# F7 q* ^6 \1 ]4 L' O- ~
二、用移液枪吹散后再取虽说好些（据说过度吹散对细胞生长是有影响的），但体积较大的时候也不能完全吹散的。
三、离心收集细胞用合适体积的培养基重悬后并吹散再取（不少人提到离心对细胞来说会出现损伤甚至损失的后果）。

作者: 细胞海洋 时间: 2016-1-21 10:50

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作者: suhua478357313 时间: 2016-1-21 11:07

细胞培养的密度一般控制在哪个范围较好，还有细胞密度与CD3+CD4+/CD3+CD8+的比例有关系吗？谢谢。

作者: 细胞海洋 时间: 2016-1-22 12:03

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