干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 无血清培养基如何终止胰酶消化的？ [打印本页]

作者: 1195963542 时间: 2016-1-17 13:23 标题: 无血清培养基如何终止胰酶消化的？

无血清培养基如何终止胰酶消化的？终止原理？

作者: king8 时间: 2016-1-17 16:51

加胰蛋白酶抑制剂，我们都是这么加的。

作者: 1195963542 时间: 2016-1-17 19:15

回复 king8 的帖子3 Y& Q' | C' q8 D/ |0 y

之后离心去掉？

作者: king8 时间: 2016-1-17 20:32

是的，之后步骤同血清终止方法。

作者: 蚂蚁上树 时间: 2016-5-12 15:24

我们是用加血清的培养基终止，终止后再离心去上清就好了

作者: 刘小明 时间: 2016-7-15 21:26

谢啦

作者: winstonsee 时间: 2016-9-30 15:13

加血请终止消化或者足量的PBS稀释胰酶即可

作者: 晗晗 时间: 2016-10-9 15:42

加血清终止消化5 I+ H/ j: o# U; g

作者: 吃呆猫 时间: 2016-11-17 10:42

可以用加FBS的培养基终止，加的数量大于现有的胰酶的体积，如果你想直接收细胞，直接加1-2%的PBS+FBS即可

作者: wzs1985 时间: 2017-1-16 11:27

直接加有血清培养基，然后离心。在用无血清培养基重悬一遍应该可以了。

作者: 生物太次郎87 时间: 2017-2-28 09:24

加有血清的培养基就能终止，终止的原因可能是稀释作用占主导（大于对胰蛋白酶的抑制作用），酶活性骤降。上述观点是个人猜测，欢迎交流学习。

作者: MCARS 时间: 2017-2-28 11:06

要看你的培养体系了，如果是临床级别的是不能用血清终止的，只能用无血清的培养基或缓冲液高倍数稀释酶的浓度，再尽快离心去除，如果是研究用的细胞就可以直接加血清终止了，简单粗暴

作者: MCARS 时间: 2017-3-1 09:44

纠正一下，血清终止胰酶消化的作用很大一部分是因为存在钠离子和镁离子等金属离子与酶蛋白分子上的结合位点作用使酶失活，在酶中添加金属离子螯合剂增强消化活性也是这个原理，因此如果不能使用血清终止也可以使用含金属离子的溶液

作者: 紫风铃9897 时间: 2017-7-3 17:08

king8 发表于 2016-1-17 16:51
# {; f5 R% U" S: u9 E0 s0 `加胰蛋白酶抑制剂，我们都是这么加的。

' n% z: D; o# s& T+ _* N& X8 h' ^
还要加其它的吧

作者: 紫风铃9897 时间: 2017-7-3 17:09

winstonsee 发表于 2016-9-30 15:13
0 w/ _& Z; b# [$ u. A加血请终止消化或者足量的PBS稀释胰酶即可

/ I' E- q0 ]- S) ^5 P' d' V
看来有很多不同的版本

作者: 紫风铃9897 时间: 2017-7-7 17:33

MCARS 发表于 2017-3-1 09:44
3 k) _- b2 p: D. O; k纠正一下，血清终止胰酶消化的作用很大一部分是因为存在钠离子和镁离子等金属离子与酶蛋白分子上的结合位点 ...

. _. {& b0 r6 O, ^2 g+ A4 y
这个很专业，解释的很好，很实用，喜欢

作者: 紫风铃9897 时间: 2017-7-7 17:35

MCARS 发表于 2017-2-28 11:06 , |, N2 I& j5 m) A- s2 W
要看你的培养体系了，如果是临床级别的是不能用血清终止的，只能用无血清的培养基或缓冲液高倍数稀释酶的浓 ...

- S5 u- ^. r% }5 R
这个方法真的很好，很实用，赞一个

作者: paomosheshou 时间: 2017-8-4 13:57

无血清的细胞上清也是可以终止消化的，我们老师说的

作者: siyubai1008 时间: 2017-8-8 14:38

我直接用胰酶润洗一下，吸掉胰酶，然后放培养箱消化就下来了直接传代培养就可以了没有什么问题不怕麻烦的话就离心洗一遍

作者: 刘小白and刘小黑 时间: 2023-10-20 09:24

加入血清竞争性终止，加入大体积PBS或者生理盐水，稀释性终止。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)