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标题: NK培养谁知道这是那个文献的呢？多谢 [打印本页]

作者: xuexi123 时间: 2016-1-19 17:29 标题: NK培养谁知道这是那个文献的呢？多谢

本帖最后由 xuexi123 于 2016-1-19 17:42 编辑

培养材料：
无血清培养基GT -T551、生理盐水、淋巴细胞分离液Ficoll、人血白蛋白、自体血浆9 R+ D- {8 Z- W6 \
细胞因子：IL-2（1000IU/ml）、Anti-Human CD3（5ug/ml）、IL-12(500IU/ml）、IL-15(500IU/ml）: P# X. {# a( w$ y: q1 O8 c* C# S" a; U( V
操作步骤：9 X% q/ p0 |# I5 n" f5 {0 M" u5 A. h8 o+ L
1、采血机采集外周成分血50ml ，用生理盐水1:1进行稀释，1 v6 L' l# v' M# K! O
2、由Ficoll液分离，去红细胞，收集初步纯化的单个核细胞：经Ficoll液梯度离心分离单个核细胞，Ficoll液与待分离的单个核细胞悬液比例为3:5分离方法: 取新的50ml离心管，没管加入15mlFicoll分离液，将25ml单核细胞悬液，贴壁轻轻加入管中Ficoll液液面上，注意单个核细胞悬液的加入不能打破离心管中Ficoll液的液面，离心2000rpm/min，20min，升速1，降速0，离心后，液面分为四层，小心吸取第二层的单核细胞层，用无血清GT-T551洗涤2次，离心1800rpm/min，5min，20℃，弃去上清，再用5ml无血清培养液混悬。: [5 D) x) d7 b
3、细胞计数：吸取约200ul的细胞悬液与1.5mlEP管内，另取一个新的EP管加入90ul台盼蓝和10ul细胞悬液，用血球计数板进计数。4 j7 Z7 M) F# i& H9 b0 x* m4 d
4、将PBMC密度调整为2X106/ml，转入T75瓶中，培养基加入CD3McAb、IL-2、IL-12、IL-15，并置于培养箱中培养。每隔3d半量换液，并补充相应的细胞因子和自体血浆。& J0 b" ~1 Q" R: _' @* @# v
5、收集悬浮细胞：培养第10d观察NK细胞并收获NK：将培养瓶内细胞悬液转移至50ml的离心管中，1800rpm,离心5min。去上清，用生理盐水再洗细胞2遍，最后将细胞组分混悬在100ml含1%人血清白蛋白注射用生理盐水中，转入细胞回输袋内，制成NK回输液。

作者: 121qwq 时间: 2016-1-21 14:52

细胞治疗真的不好规范啊

作者: baby00000003 时间: 2016-1-22 15:08

也许是T－551的说明书吧？

作者: 吕小松 时间: 2016-1-22 15:27

IL-15的作用是什么？

作者: 飞翔的烨 时间: 2016-1-22 17:54

回复 xuexi123 的帖子% d1 ?& O% x, N1 z

怎么可能这么简单

作者: 小沙弥敲木鱼 时间: 2016-1-23 20:58

找到了么

作者: yingfeixiang 时间: 2016-9-1 16:57

这个是别人发的，拷贝的吧

作者: yingfeixiang 时间: 2016-9-1 16:57

回复 xuexi123 的帖子) X/ E, U% H: T; {
1 S" r- G# R {; z# F
不是文献，是别人的总结

作者: 免疫与细胞 时间: 2016-9-4 09:35

这个参考意义不大。

作者: wozuixie 时间: 2016-9-4 12:23

这个参考意义不大。- u- x1 i E7 _

作者: xblong 时间: 2019-12-29 15:39

你这T细胞比例会很高

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