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标题: CD3抗体包被vs直接添加 [打印本页]

作者: 醉心科研 时间: 2016-2-15 11:09 标题: CD3抗体包被vs直接添加

关于CD3单抗是包被好还是直接添加好，论坛里已讨论过好几个帖，这里不涉及这个问题。$ b7 K8 d; [$ A, q6 ]
就是有一点不明白，包被是接种之前就包被好了，而直接添加是伽马诱导24h之后加的。那么这两个时间点不一样啊，哪个时间添加更好呢？

作者: 繁华落尽 时间: 2016-2-15 11:37

回复醉心科研的帖子. x( P6 L, A2 s0 S# H3 c0 s& L2 }
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这个实验我们做过，CD3正常包被的时候都是在接种之前包被，时间大概为接种前12h，包被的效果和不包被的效果没什么区别，唯一就是包被后的细胞，前期易贴壁生长.另外也可以采纳用血浆包被或者是纤维连接蛋白FN" i" A7 \) R0 g- b

作者: Sarge 时间: 2016-2-15 11:46

效果是差不多的，包被太费抗体

作者: 醉心科研 时间: 2016-2-15 14:06

可能我问的不够清楚。我关心的是加入时间的问题。/ E- M! K( ^+ W* c! w
按照包被的时间算，相当于在接种0h时加入的anti-CD3，而一般加都是24h后再加。这样算来，是不是直接在接种时加入溶解好的anti-CD3也行呢？

作者: zerollx 时间: 2016-2-15 16:59

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添加可溶性抗体CD3和CD28的浓度一般是多少啊

作者: Sarge 时间: 2016-2-15 17:30

浓度得自己摸条件，不同的品牌和培养体系用的浓度都是不一样的

作者: Sarge 时间: 2016-2-15 17:31

一般是在50-100ng/ml

作者: Sarge 时间: 2016-2-15 17:35

回复 zerollx 的帖子
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浓度得自己摸条件，不同的品牌和培养体系用的浓度都是不一样的

作者: a276038921 时间: 2016-2-16 08:45

感觉包被的细胞后期生长的要比直接添加的好，而且不容易结团

作者: baoweih 时间: 2016-2-17 10:33

回复醉心科研的帖子

可以接种时加配好的CD3培养基，两天后再加含IL-2的培养基，这种方法细胞没有包被的生长得快

作者: zmfang555 时间: 2016-2-17 11:26

包被的由于CD3有效浓度大，细胞获得的刺激较强，前期生长较快，但后期生长较慢，如添加CD28效果更明显。

作者: 清如许231 时间: 2016-2-24 15:28

关于激活有很多说法，提前包被，或者后期不加，还有二次激活一说，但都能达到激活目的就可以了，目前是这样，但是不能理解为什么只加CD3不加CD28也能激活，对于T细胞活化，不是说需要双信号么？CD3/TCR CD28/B7，如果T细胞缺乏共刺激信号会T细胞无能？？求解释

作者: 醉心科研 时间: 2016-2-25 09:16

回复清如许231 的帖子4 V; ]3 Z8 |) ]. d( W* b
9 k: z5 P# e& W2 u- u
我做过一次28加与不加的对比，我的结果是扩增效果没有差异，不知道其他人什么结果？

作者: 清如许231 时间: 2016-2-25 13:14

回复醉心科研的帖子" o. _) j6 u1 L
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我也尝试过不加CD28，但是理论依据何在？

作者: zmfang555 时间: 2016-2-25 14:51

我们做过这个实验，直接分离细胞后加CD3和24小时添加，效果没有什么区别，但是不要超过24小时，往后就有影响了。

作者: momoenn 时间: 2016-2-27 14:56

包被的细胞活化快，前期增殖较快。但从整个培养过程看，没有明显的优势，而且还需要比较大的量

作者: biluolinyu 时间: 2016-2-29 13:41

回复醉心科研的帖子
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请问一下，您CD28使用量与CD3相同么

作者: 醉心科研 时间: 2016-2-29 14:05

回复 biluolinyu 的帖子! C% ?" {9 c2 G6 z D1 M: {0 f
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是的，我查到的资源都是说添加相同的量。, Q/ U" {' I/ O8 k- p5 n/ I4 }% G) n+ b
你也试试吧，如果有结果了欢迎来讨论。

作者: biluolinyu 时间: 2016-3-1 08:43

回复醉心科研的帖子
7 K8 k5 T4 K9 b
嗯嗯，谢谢楼楼

作者: xiaoxiaodeji 时间: 2016-3-9 11:18

问下，是怎样包被呢

作者: 我是传奇 时间: 2016-3-18 11:17

包被，固定相对于细胞的刺激效果要大于游离相。

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