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标题: CD3抗体包被vs直接添加 [打印本页]

作者: 醉心科研    时间: 2016-2-15 11:09     标题: CD3抗体包被vs直接添加

关于CD3单抗是包被好还是直接添加好,论坛里已讨论过好几个帖,这里不涉及这个问题。
  G2 I/ g' p, E4 z就是有一点不明白,包被是接种之前就包被好了,而直接添加是伽马诱导24h之后加的。那么这两个时间点不一样啊,哪个时间添加更好呢?
作者: 繁华落尽    时间: 2016-2-15 11:37

回复 醉心科研 的帖子
% i: f1 P2 G- h1 `; N: y( y& R6 [/ j' B/ K0 |
这个实验我们做过,CD3正常包被的时候都是在接种之前包被,时间大概为接种前12h,包被的效果和不包被的效果没什么区别,唯一就是包被后的细胞,前期易贴壁生长.另外也可以采纳用血浆包被或者是纤维连接蛋白FN1 X; m3 {) B" s

作者: Sarge    时间: 2016-2-15 11:46

效果是差不多的,包被太费抗体
作者: 醉心科研    时间: 2016-2-15 14:06

可能我问的不够清楚。我关心的是加入时间的问题。: Z; w5 g! [8 V: B' m$ P  m/ j
按照包被的时间算,相当于在接种0h时加入的anti-CD3,而一般加都是24h后再加。这样算来,是不是直接在接种时加入溶解好的anti-CD3也行呢?
作者: zerollx    时间: 2016-2-15 16:59

回复 Sarge 的帖子, [! t1 Q1 Z) S' |! y

; l/ _# w8 _+ o. D添加可溶性抗体CD3和CD28的浓度一般是多少啊; ?' y) |3 G& W

作者: Sarge    时间: 2016-2-15 17:30

浓度得自己摸条件,不同的品牌和培养体系用的浓度都是不一样的
作者: Sarge    时间: 2016-2-15 17:31

一般是在50-100ng/ml
作者: Sarge    时间: 2016-2-15 17:35

回复 zerollx 的帖子; |* U" `  U$ W0 t. [* U

9 |* J$ B  Q2 d/ C. G* n- z% {
: ]0 H! n, m6 A' O浓度得自己摸条件,不同的品牌和培养体系用的浓度都是不一样的
作者: a276038921    时间: 2016-2-16 08:45

感觉包被的细胞后期生长的要比直接添加的好,而且不容易结团
作者: baoweih    时间: 2016-2-17 10:33

回复 醉心科研 的帖子/ D9 v) c3 ]8 r0 z7 ]% K8 B9 f) b& b! P

9 V- k$ ?, C! j- _' `可以接种时加配好的CD3培养基,两天后再加含IL-2的培养基,这种方法细胞没有包被的生长得快
作者: zmfang555    时间: 2016-2-17 11:26

包被的由于CD3有效浓度大,细胞获得的刺激较强,前期生长较快,但后期生长较慢,如添加CD28效果更明显。
作者: 清如许231    时间: 2016-2-24 15:28

关于激活有很多说法,提前包被,或者后期不加,还有二次激活一说,但都能达到激活目的就可以了,目前是这样,但是不能理解为什么只加CD3不加CD28也能激活,对于T细胞活化,不是说需要双信号么?CD3/TCR  CD28/B7,如果T细胞缺乏共刺激信号会T细胞无能??求解释
作者: 醉心科研    时间: 2016-2-25 09:16

回复 清如许231 的帖子
( q9 a- Z1 E! m
+ V4 m: N: o4 H: b: r我做过一次28加与不加的对比,我的结果是扩增效果没有差异,不知道其他人什么结果?
作者: 清如许231    时间: 2016-2-25 13:14

回复 醉心科研 的帖子
. r2 w6 D) P  Z( Q4 I
+ J& H# T) e! q: k. B我也尝试过不加CD28,但是理论依据何在?
作者: zmfang555    时间: 2016-2-25 14:51

我们做过这个实验,直接分离细胞后加CD3和24小时添加,效果没有什么区别,但是不要超过24小时,往后就有影响了。
作者: momoenn    时间: 2016-2-27 14:56

包被的细胞活化快,前期增殖较快。但从整个培养过程看,没有明显的优势,而且还需要比较大的量
作者: biluolinyu    时间: 2016-2-29 13:41

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6 n4 t, M1 |) l" o: u
5 j8 w6 A$ D1 D1 R: t" E请问一下,您CD28使用量与CD3相同么
作者: 醉心科研    时间: 2016-2-29 14:05

回复 biluolinyu 的帖子* z4 q) Q+ E0 c- U7 t

9 l$ f0 c+ ^, {+ w9 S8 |5 P6 l是的,我查到的资源都是说添加相同的量。
% x& E. \( }$ k. j! ^你也试试吧,如果有结果了欢迎来讨论。
作者: biluolinyu    时间: 2016-3-1 08:43

回复 醉心科研 的帖子4 K: B3 e+ y% @3 T" L* W* s( L

8 h5 P' g% S' R; J. D) [嗯嗯,谢谢楼楼
作者: xiaoxiaodeji    时间: 2016-3-9 11:18

问下,是怎样包被呢
作者: 我是传奇    时间: 2016-3-18 11:17

包被,固定相对于细胞的刺激效果要大于游离相。




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