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标题: 关于细胞培养厌氧菌污染问题 [打印本页]

作者: hawkyiger 时间: 2016-2-22 08:33 标题: 关于细胞培养厌氧菌污染问题

我们实验室培养脐带间充质干细胞，已实现小规模生产两年有余，但最近在取细胞冻存前培养液检菌时连续出现厌氧菌阳性，用的是梅里埃的全自动血培仪，不知道各位有没有类似情况出现，实验室卫生清洁都是常规的，还没有分析出原因

作者: 大少爷 时间: 2016-2-22 08:55

冻存前培养液检菌时连续出现厌氧菌阳性，这种情况只能是细胞废弃了，这几次细胞是否来源于同一条脐带或者同一批种子细胞，如果是那就是这上面的问题。如果是不同来源不同批次细胞都出现这种问题，可能是共用的哪个试剂有问题。这两个可能性最大。

作者: hawkyiger 时间: 2016-2-22 09:37

回复大少爷的帖子* X; `1 v4 ]8 w8 t9 m8 j) }" g
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属于不同来源不同批次的细胞，一开始也考虑是试剂或操作原因，但是在连续冻存的样本中，并不是所有的全部出现污染，另外厌氧菌的出现感觉很难理解，使用的是细胞培养瓶，细胞在经过1个月左右的培养后竟然出现厌氧菌污染很蹊跷。

作者: swtarron 时间: 2016-2-22 12:14

要从细胞来源、所用物料和培养基批次、培养箱、生物安全柜等几个方面综合分析，还有看是不是梅里埃的问题，我们以前出过梅里埃同一个孔连续需氧菌报阳的问题，最后发现是梅里埃的问题。

作者: 大少爷 时间: 2016-2-22 13:45

实在找不到原因，配培养基时在1L培养基加两支 80 万 IU 硫酸庆大霉素注射液。

作者: fuyinsheng 时间: 2016-2-23 09:50

首先确认污染的是不是一个脐带上的细胞，是不是主细胞库该批次细胞污染。然后检测下确定目前实验室用的这批试剂和耗材没有问题。梅里埃培养的厌氧瓶最好送到微生物鉴定机构去查一下微生物种类（可以推测菌属和菌种来源，方便调查污染原因）顺便确定是否存在血培养仪假阳性。厌氧菌增殖不像需氧菌那么快，染菌量的数量少时培养后期才发现也正常。% Q: j( H# w% y9 V4 w( U! O
如果这些细胞是前期检过菌，合格后冻存的细胞也属正常，因为厌氧菌污染梅里埃血培养仪检出率并不是百分之百（增加取样量能提高菌的检出），前期制备培养主细胞库时有可能没有检出，后期细胞培养中菌多了才检测出来。

作者: a276038921 时间: 2016-2-23 16:08

还是从设备上检查检查吧，

作者: 毛球 时间: 2016-3-14 10:53

检查细胞培养箱，彻底消毒

作者: pauldong 时间: 2016-4-13 23:07

将阳性的检测瓶取出，然后取样、接种培养、染色，鉴定是哪一种类型菌种，分析可能原因是由哪个环节引入的，然后各个环节全面排查，重点排查可疑环节

作者: Demon_CN 时间: 2016-4-15 20:05

你这边的话得排除下大面积污染的原因。1 I. [: f5 P! N, l4 @) k9 L, F
1、试剂：换一批培养基，或者培养前检测下，没有问题再排除其他的
2、种子细胞：复苏不同液氮罐里、不同批次的细胞，或者复苏洗涤的时候可以留样检测
3、培养箱：这个同种菌种污染几率也比较大。这个想检测的话就用培养板放一个小时然后检测下是否有菌
4、耗材：这个方便比较难查，问问供应商三证和进货渠道。不行换批耗材
人员空间环境这个就看管理了。

作者: 枫之叶影 时间: 2016-5-12 13:48

冻存前出现厌氧阳性可能原因是血培养仪的原因或者是耗材的问题吧，更换一批耗材试试看

作者: gehengcui 时间: 2016-8-9 08:29

回复 hawkyiger 的帖子

您好，我们实验室今天也出现类似的问题了，请问您那里找到具体原因了吗？都冻存了，才出问题。很郁闷，求赐教~

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