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标题: 洗之前我观察细胞了里边应该有细胞，细胞用PBS洗一次后，再用胰酶消化后，细胞基本没 [打印本页]

作者: jenny114402 时间: 2016-2-29 14:50 标题: 洗之前我观察细胞了里边应该有细胞，细胞用PBS洗一次后，再用胰酶消化后，细胞基本没

本帖最后由细胞海洋于 2016-2-29 22:41 编辑 ( d7 N0 @, ], ?8 f
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我记得洗之前我观察细胞了里边应该有细胞，细胞用PBS洗一次后，再用胰酶消化后，细胞基本没有了，不知道为什么？

作者: yooung 时间: 2016-2-29 16:51

可能原因1：细胞贴壁不紧，PBS洗掉了。
可能原因2：胰酶消化掉了。从你表述的话：“里边应该有细胞”，可知里面细胞可能不多，如果按正常的胰酶量去消化，可能造成相对胰酶过量。

作者: 木头1102 时间: 2016-2-29 20:19

有没有可能细胞量比较少，离心时离心力选择不当，导致细胞没有离下来或者弃上清时损失比较大

作者: xuyang0317 时间: 2016-2-29 22:36

我觉得最大的可能性是细胞贴壁不牢固，在你用PBS清洗的时候被清洗掉了，在细胞较少的情况下你不应该急着进行传代，而是要想办法把你的细胞养起来再进行传代，你消化后没有观察你的培养瓶吗？初学传代时都要看消化后的培养瓶的，总结传代经验消化时间吹打力度清洗得怎么样等，这些都要谨慎学习！

作者: zhangjieyctc 时间: 2016-3-1 09:27

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看来是因为你的细胞贴壁不牢，原因有很多，比如洗的时候动作幅度比较大，也有可能是因为你的培养皿（或培养瓶）培养面没处理好，导致细胞贴壁不牢的；还有其它原因可能，比如消化过度，离心速度过大或过小等。

作者: jenny114402 时间: 2016-3-1 09:30

回复 yooung 的帖子& H3 Y' `3 w. w, _' y( I

细胞基本没有，能看到几个，而且和它一起培养的不同脐带细胞都正常贴壁，细胞养了3天

作者: jenny114402 时间: 2016-3-1 09:31

回复木头1102 的帖子/ \1 o) q2 d/ ~
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还没有离心呢，就是胰酶消化时观察细胞，发现瓶里细胞几乎都没有了

作者: jenny114402 时间: 2016-3-1 09:32

回复 xuyang0317 的帖子% q7 F( N' F }0 ~( C
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我就是消化后观察的，里边基本没细胞，细胞我养了3天，量也还可以

作者: jddakui 时间: 2016-3-1 09:39

消化之前有观察吗？一般贴壁细胞不会轻易被洗掉，除非细胞有老化现象，还有就是镜头是不是没有对焦？细胞都在瓶底角落？

作者: lgfffancy 时间: 2016-3-1 09:45

很简单，你的细胞铁壁性不强，用PBS冲洗后，细胞就被洗走了一大部分，
所以你用胰酶消化后，你发现细胞不多了。

作者: tingting2113 时间: 2016-3-1 10:05

回复 jenny114402 的帖子$ L$ N' O% @0 |+ Z
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大概有三种可能：0 o7 [7 d l5 O
1、消化过程没有把握好，可能根本没消化下来，细胞还贴在培养面，或者消化过度，细胞碎了。0 s( C: ?" d! ^8 N
2、细胞贴壁不牢，PBS洗时给冲下来洗掉了。8 |3 e- I* I f, |
3、离心的时候没离下来，丢弃了。

作者: jenny114402 时间: 2016-3-1 11:57

回复 zhangjieyctc 的帖子

估计是贴壁不牢，我培养了3天呢

作者: xuyang0317 时间: 2016-3-1 16:43

回复 jenny114402 的帖子4 `0 a# g% [' n2 V8 \$ K
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你这是原代细胞还是经过了传代的？原代的细胞养3天也是很少的！如果细胞有一定的量，不可能消化没了，离心机的转速呢？还有离心完是缓慢降速的！细胞肯定在，不可能无缘无故的没了！

作者: 晗晗 时间: 2016-4-8 09:52

消化时间长了

作者: 晗晗 时间: 2016-4-13 09:33

可能是细胞贴壁没贴好用PBS洗掉啦，还有一种可能就是酶消化时间长啦，没消化好

作者: meredith603 时间: 2016-4-14 17:15

都没搞懂你问的问题。是细胞贴壁养了三天以后，观察到了贴壁细胞，然后PBS洗了一次，胰酶消化，就没有了？什么叫没有了？胰酶消化了多长时间？哪怕是半小时细胞也在皿里啊，只是从贴壁变成了悬浮。

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