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标题: 关于CIK培养过程中产生的絮状物，求高手指点 [打印本页]

作者: seergene 时间: 2016-3-17 19:15 标题: 关于CIK培养过程中产生的絮状物，求高手指点

最近有一例血脂特别高的患者，血液分离后，血浆里的脂肪特别多，即使灭活离心后仍是如下图。培养时用了T551培养基，加入了人血白蛋白。前2天都正常，第3天传入175培养瓶后开始出现絮状物，细胞都聚集到一起。此絮状物不是正常CIK增殖过程中产生的细胞团，无法吹散。细胞生长状态受到严重影响，增殖速度变慢。哪位高手遇到过类似现象，跪求解决办法，最好可以让细胞恢复到正常状态，谢谢！！！" q5 _1 d1 A) }8 F) o: J) x

作者: seergene 时间: 2016-3-17 19:16

最近一直在观察，最近2天絮状物增多，但是单个的细胞很少。

作者: 小沙弥敲木鱼 时间: 2016-3-17 21:26

养养看吧，血浆油脂太高，建议不要加了。絮状物是细胞么？

作者: 细胞海洋 时间: 2016-3-17 22:49

请教CIK培养过程中出现的絮状物问题！！！
http://www.stemcell8.cn/thread-69130-1-1.html

作者: seergene 时间: 2016-3-17 23:10

回复小沙弥敲木鱼的帖子
" q2 u0 ?1 Y. Z0 k- N2 Z& ^* ~2 V& Q
是细胞，形态上看起来有点像CIK，但不确定。

作者: cloudycity 时间: 2016-3-17 23:53

1.不是CIK是死细胞团····会粘住正常细胞，越养越惨····很难再长了···用100微米的滤网过滤，然后再把体系降下，培养密度提高来试试···; I9 h% }7 i6 T x
2. 吸白膜层的时候尽量只吸那一层，其他的都不要了。1 {/ ?$ ]/ y. H+ ~
3.我觉得是其他的一些免疫细胞（巨噬、单核、粒细胞）死掉后会放出的蛋白网···（猜测···）

作者: biluolinyu 时间: 2016-3-18 07:49

首先要确保同一批次的培养瓶没有问题，有些时候实验中用到的耗材有些问题会导致细胞出现上述情况; v; z+ j5 @( A
其次楼主不要再添加血浆了，可能是由于血浆内的油脂过高导致的，如果必须要添加血浆可以尝试-20保存后4度融化，然后在离心取上清
这种情况的絮状物应该不是粒细胞死后释放出的遗传物质造成的，如果是其他细胞死后造成的絮状物，会比这个长，基本在第二天就会出现6 f' C/ d3 v; V: s3 M
如果楼主5天之后仍然觉得培养效果不好，或者是血浆处理后仍然无法继续使用，可以将培养基更换为x-vivo

作者: biluolinyu 时间: 2016-3-18 07:49

另外楼主的抗凝剂是什么，枸橼酸钠还是肝素

作者: seergene 时间: 2016-3-18 09:58

回复 cloudycity 的帖子2 Q" e! Y. l3 M
! A$ w/ M' L( [% n1 w
谢谢了，今天会处理一下试试，有消息会随时更新的。

作者: seergene 时间: 2016-3-18 10:02

回复 biluolinyu 的帖子
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自体血浆始终没加，加了点白蛋白，也不多。应该不是死细胞导致的，絮状的东西是第3天才出现的。

作者: seergene 时间: 2016-3-18 10:02

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肝素钠

作者: mengnancy 时间: 2016-3-18 10:38

细胞本身质量问题，增殖能力差，细胞死亡，蛋白、DNA等释放，具有粘性，细胞培养3-7天都会出现这样的情况。建议发现后立即将死亡细胞团过滤掉，提高细胞培养密度，观察是否能正常增殖。

作者: lyj-0017 时间: 2016-3-18 14:27

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你这个絮状物就是死细胞黏连正常细胞的结果，吸出来废弃掉吧，基本与患者的细胞质量有关系，也与你的操作手法有一定关系，前几天不要乱动细胞。

作者: fenlichong 时间: 2016-3-18 18:24

你直接将灭活后的血浆加入所用的培养基中，放入培养箱中培养1-3天，看是否同样会出现絮状物，如果会就是血浆的问题，如果不会，就再找原因。

作者: 994545 时间: 2016-3-30 19:06

最近用了国产的培养基，细胞后期果断出现了絮状的细胞团，其他条件都一样。

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