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标题: 关于CIK培养过程中产生的絮状物,求高手指点 [打印本页]

作者: seergene    时间: 2016-3-17 19:15     标题: 关于CIK培养过程中产生的絮状物,求高手指点

最近有一例血脂特别高的患者,血液分离后,血浆里的脂肪特别多,即使灭活离心后仍是如下图。培养时用了T551培养基,加入了人血白蛋白。前2天都正常,第3天传入175培养瓶后开始出现絮状物,细胞都聚集到一起。此絮状物不是正常CIK增殖过程中产生的细胞团,无法吹散。细胞生长状态受到严重影响,增殖速度变慢。哪位高手遇到过类似现象,跪求解决办法,最好可以让细胞恢复到正常状态,谢谢!!!+ \; ]" Y; E' x

作者: seergene    时间: 2016-3-17 19:16

最近一直在观察,最近2天絮状物增多,但是单个的细胞很少。
作者: 小沙弥敲木鱼    时间: 2016-3-17 21:26

养养看吧,血浆油脂太高,建议不要加了。絮状物是细胞么?
作者: 细胞海洋    时间: 2016-3-17 22:49

请教CIK培养过程中出现的絮状物问题!!!4 q" r9 V" f* ^0 V2 p$ N; B4 ^
http://www.stemcell8.cn/thread-69130-1-1.html( y$ |3 i: f7 n5 N- W4 q5 K+ C0 _

作者: seergene    时间: 2016-3-17 23:10

回复 小沙弥敲木鱼 的帖子1 S# D' h7 l0 F0 h6 z$ ~

+ g* K& b. t  i6 o4 {6 d6 Z是细胞,形态上看起来有点像CIK,但不确定。
作者: cloudycity    时间: 2016-3-17 23:53

1.不是CIK是死细胞团····会粘住正常细胞,越养越惨····很难再长了···用100微米的滤网过滤,然后再把体系降下,培养密度提高来试试···) D1 c6 J+ A; i5 J
2. 吸白膜层的时候尽量只吸那一层,其他的都不要了。
& j( F4 }3 y$ t8 E. |3.我觉得是其他的一些免疫细胞(巨噬、单核、粒细胞)死掉后会放出的蛋白网···(猜测···)
作者: biluolinyu    时间: 2016-3-18 07:49

首先要确保同一批次的培养瓶没有问题,有些时候实验中用到的耗材有些问题会导致细胞出现上述情况6 s/ k- v! ?3 W' b
其次楼主不要再添加血浆了,可能是由于血浆内的油脂过高导致的,如果必须要添加血浆可以尝试-20保存后4度融化,然后在离心取上清
: m9 A7 E5 \8 f- R这种情况的絮状物应该不是粒细胞死后释放出的遗传物质造成的,如果是其他细胞死后造成的絮状物,会比这个长,基本在第二天就会出现0 V2 R3 n1 ~  ?. U  j% j
如果楼主5天之后仍然觉得培养效果不好,或者是血浆处理后仍然无法继续使用,可以将培养基更换为x-vivo
作者: biluolinyu    时间: 2016-3-18 07:49

另外楼主的抗凝剂是什么,枸橼酸钠还是肝素
作者: seergene    时间: 2016-3-18 09:58

回复 cloudycity 的帖子) q0 R- n6 I  N/ l

6 H7 A+ T* q( \8 M( N* Z谢谢了,今天会处理一下试试,有消息会随时更新的。
作者: seergene    时间: 2016-3-18 10:02

回复 biluolinyu 的帖子
2 X+ I8 h  |$ ?
% w$ g5 l# h# Q1 p自体血浆始终没加,加了点白蛋白,也不多。应该不是死细胞导致的,絮状的东西是第3天才出现的。
作者: seergene    时间: 2016-3-18 10:02

回复 biluolinyu 的帖子
( F1 B$ g$ R$ Z- S0 D1 q& W3 {% @7 R6 B8 a' v5 T( }
肝素钠
作者: mengnancy    时间: 2016-3-18 10:38

细胞本身质量问题,增殖能力差,细胞死亡,蛋白、DNA等释放,具有粘性,细胞培养3-7天都会出现这样的情况。建议发现后立即将死亡细胞团过滤掉,提高细胞培养密度,观察是否能正常增殖。
作者: lyj-0017    时间: 2016-3-18 14:27

回复 seergene 的帖子; {6 R: I$ Y! x! U* I& V
* r1 q( Y8 I% H3 l6 o- F
你这个絮状物就是死细胞黏连正常细胞的结果,吸出来废弃掉吧,基本与患者的细胞质量有关系,也与你的操作手法有一定关系,前几天不要乱动细胞。
作者: fenlichong    时间: 2016-3-18 18:24

你直接将灭活后的血浆加入所用的培养基中,放入培养箱中培养1-3天,看是否同样会出现絮状物,如果会就是血浆的问题,如果不会,就再找原因。
作者: 994545    时间: 2016-3-30 19:06

最近用了国产的培养基,细胞后期果断出现了絮状的细胞团,  其他条件都一样。




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