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标题: 脐带间充质干细胞的消化传代 [打印本页]

作者: 五口二木 时间: 2016-3-19 19:53 标题: 脐带间充质干细胞的消化传代

养了一年的脐带间充质干细胞，一直在消化传代这一环节折腾，想请问各位大神，一般等组织块的细胞爬出多少才传代？我的细胞传代后贴壁的细胞稀少，根本无法再继续长啊

作者: baby00000003 时间: 2016-3-21 09:01

换换酶吧～

作者: 月_幻影 时间: 2016-3-21 09:19

一般来说，组织块培养7~14天后就有细胞爬出了，我们养的时候一般是发现细胞爬出（比较少）后换液2~3此后进行消化重铺（在原瓶里重铺，P1代的细胞不要换新瓶，用原瓶有利于她贴壁），重铺后待其生长起来再进行传代，另外原代消化的时候要注意及时镜下观察，防止消化过度；传代的时候细胞密度不宜过低，不然很快就会老化死亡了。。。我们做时P1代一般也就一传二。

作者: lgfffancy 时间: 2016-3-21 09:23

组织块培养7~14天后差不多就有细胞爬出；
P1传代一传二；
注意不要过度消化。

作者: 1276916287 时间: 2016-3-21 10:28

一般7天左右就有细胞从组织块边缘爬出，15天左右可以传代（以多个组织块都有细胞爬出，且细胞生长至80%左右），当然，不同的脐带组织时间会有差别。可以在7天左右的时候进行换液，后续的话根据培养情况进行换液。在原代细胞包括后续的细胞传代过程中，一定要注意胰酶的使用浓度，同时注意消化时间，这是干细胞传代过程中很重要的，因为胰酶浓度过高及消化时间过长往往会导致传代后的细胞不容易贴壁，同时还会加速干细胞的衰老。

作者: king8 时间: 2016-3-21 17:28

贴壁法还是比较容易的，贴壁正常培养一周时间就可以了，贴壁的时候，组织块可以密度大些，因为会掉落一部分。一般都不会有什么问题的。

作者: 王苍金 时间: 2016-3-23 16:09

细胞融合80%开始传代，注意胰酶浓度，消化时间2分钟左右，原代不要过稀，不然很容易老化。

作者: 五口二木 时间: 2016-3-24 22:15

回复 baby00000003 的帖子2 q6 r6 l: s5 N% B0 w( g ^; P$ v4 s
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刚从别人那里借了几支酶试一下6 a, ^0 g/ P2 h, i. A2 ^

作者: 五口二木 时间: 2016-3-24 22:18

回复月_幻影的帖子6 z9 X& c+ A5 A3 _. t% r

关键是培养瓶里不是每一块组织都有细胞爬出，所以要达到80%的融合这个概念我还不是很理解，是一块组织爬出来的细胞达到80%融合呢？还是整个培养瓶底达到80%融合？

作者: 五口二木 时间: 2016-3-24 22:21

回复王苍金的帖子
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可能我之前传代的细胞密度确实太稀了，等第二天贴壁的时候去看，大部分细胞形状都铺开了，觉得分化了

作者: yxwfly 时间: 2016-3-25 08:51

一般用胰酶消化一两分钟，用手拍打瓶子，细胞就会脱落下来，然后用加了血清的培养基终止消化，并且冲洗瓶子，收集到离心管中，离心后重悬，过滤掉组织块，放入原瓶中培养。

作者: saliai2016 时间: 2016-3-28 17:13

原代因为细胞不是均匀生长
传代的时候计数还是比较重要的# [- l* m8 A/ j. j9 l( | T" U
我一般接种密度是5*104个/mL
无所谓几传几
脐带间充质干细胞还是比较容易消化的
2-3min后，轻怕培养瓶，肉眼可见细胞脱落后就用完全培养基终止

作者: yingfeixiang 时间: 2016-3-30 10:29

一般来说，组织块培养7~14天后就有细胞爬出了，爬出后看细胞克隆数量，一般每瓶有4-5个克隆就可以传代收获了，原代消化的时候要注意及时镜下观察，防止消化过度；传代的时候细胞密度不宜过低，过低影响细胞生长，一般都得105/ml

作者: Jump 时间: 2016-4-12 00:10

我们做的是等到它贴壁聚堆很密时传代

作者: 晗晗 时间: 2016-4-12 09:06

7天左右就有细胞爬出，3天左右能在显微镜下观察到贴壁细胞，半量换液，继续培养，3天后换液细胞已经能稳定生长，每3天换一次，至细胞生长铺满瓶底大约10天左右，就可以传代了，但是要注意千万不要消化过度

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