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标题: 滋养层细胞问题 [打印本页]

作者: wzm123hzy 时间: 2016-3-27 10:36 标题: 滋养层细胞问题

尊敬的老师，师兄师姐们：7 i B, c& |0 I m, V/ Q
我想问一下在铺滋养层细胞后，细胞死亡率特别高，是由于培养基中加入双抗的原因吗？一般滋养层培养液需要加入双抗吗？谢谢

作者: nichifanlema2 时间: 2016-3-27 16:33

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我觉得应该不是双抗的原因，有可能是冻存的细胞和复苏过程出现的问题。冻存时一般用含有20%的DMSO，10%-20% FBS的冻存液，用冻存盒进行程序冻存效果比较好；复苏时37度快速融化。

作者: Tim 时间: 2016-3-27 23:54

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问题没交代清楚，你怎么制备饲养层细胞的？问题的关键点，

作者: biovictor 时间: 2016-3-28 22:02

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楼主：" [: j* ~5 c) D7 ~) z$ N! t
滋养层细胞的制备关键是丝裂霉素的处理，1，如果楼主是铺板后，待细胞长满后处理，这种方法比较稳妥，方便制备大量的未处理的MEF来冻存，解冻后稍微养几天就可以达到需求密度，缺点是周期较长；2，如果是先在大皿中添加MC，然后再冻存保种，然后解冻复苏，这种方式可以快速铺板，但是缺点是会发生楼主的所述的显现，会死很多，如果冻细胞过程有问题的话，密度不好确定！

作者: fananran2003 时间: 2016-3-29 11:10

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同意楼上的意见，可能是添加丝裂霉素后冻存再复苏可能会出现上述情况，丝裂霉素的处理会照成细胞死亡，复苏后又会死亡一部分！

作者: wzm123hzy 时间: 2016-3-31 09:26

问题已解决，主要是因为细胞刚复苏，状态不好，加之铺板时没有铺好，感谢老师、师兄，师姐们的热情帮助。

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