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［求助］这份PBMC怎么回事儿？
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作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 11:10
标题:
［求助］这份PBMC怎么回事儿？
事情是这样的，我用同一份脐带血提的PBMC，分成两组，第一组加的是可溶性的OKT3，第二组是包倍的OKT3。但是发现在我把第一组PBMC加到瓶子里面之后，过了仅10几分钟，就有很多细胞贴壁死亡了。虽然我们原来做的PBMC有一部分肯定是也会贴壁，但是都是正常的单核细胞贴壁，折光度很好的。这次这个都是黑色的死细胞，而且死亡事件太快了！如果是细胞问题的话，另一份加到包倍后的瓶子里的细胞就没事儿。求解……
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[attach]77680[/attach]、
; O. I. @6 k/ G4 @1 G
上图是第一组
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[attach]77681[/attach]
3 W' h* r w3 y* {
这是第二组
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作者:
lgfffancy
时间:
2016-5-13 12:09
污染，很严重的污染
作者:
baby00000003
时间:
2016-5-13 12:38
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lgfffancy
的帖子
9 v, F+ P5 B7 w
2 O( L5 P# A+ O5 p
这是如何看出来的呢？
作者:
张月儿
时间:
2016-5-13 13:34
那应该就是可溶性的OKT3的问题了吧。污染也不会那么快出现死亡吧，应该不是污染的问题。
作者:
veda327
时间:
2016-5-13 13:39
这样我想起了一份洁净车间培训资料里面的一个细菌2小时可以变成281兆个细菌的表述
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( j3 z# g: V2 G& d! R: _7 T
我觉得应该是含有可溶性OKT3的培养体系的问题，里面含有强致死的毒性成分、溶液的pH不对，或者溶液的渗透势不对等！
作者:
veda327
时间:
2016-5-13 13:40
黑色的是细胞碎片、或者是培养体系里面某种成分的结晶
作者:
momoenn
时间:
2016-5-13 14:08
你这两个图片是怎么来的啊？你说的死细胞黑色是染色了吗？看不懂你现在细胞第几天了？没有看到实物，单看单个细胞形态和聚团情况，如果这是第2-3天的镜下直接观察的图像，好像第一个状态要好一些
作者:
hello_yun雨
时间:
2016-5-13 15:15
试剂不会是过期的吧。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:11
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momoenn
的帖子
6 y0 Y3 \; y# h. n/ }1 }
0 e% [: j) ~$ h3 J5 M t
这两个都是D0天的，没染色，那些黑色的就是死细胞。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:11
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hello_yun雨
的帖子
! q1 b% I& u% G2 Y% a/ h) I1 R
) o+ B& \- p1 P
试剂肯定不会过期的，都是4度保存的，刚分装好的。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:12
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veda327
的帖子
5 i& N/ j3 }2 d) O1 P: y
( m) v0 }3 C3 m, M3 {# p5 l
黑色的就是死细胞，可能还没到碎片的那种程度。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:12
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veda327
的帖子
& v* I# H! I- a0 n9 x$ J/ d) {! g% }
3 `- A4 I/ u4 S5 J; b, t9 X! J
但是原来我们也是这么操作的，问题是，就算我OKT3加的量多少，不可能刚加进去没几分钟细胞就成这样子啊
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:13
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张月儿
的帖子
# J1 R! L5 d- d/ S% f- o ]+ b1 {
! V. X' o [* P0 o' |: Q
但是我用OKT3包被就没啥问题
作者:
lgfffancy
时间:
2016-5-13 16:47
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lgfffancy
的帖子
! ~) O% ^1 _9 U* T
) u4 }. K/ g2 b5 r
我以前养细胞液出现过这样的情况
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:58
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lgfffancy
的帖子
" b' I/ {" P" z9 L: P, R8 u
! n- m! x' X4 {. \9 }7 d: C
怎么解决的？找到原因了吗？
) S+ j/ a o) ~1 Q
作者:
lgfffancy
时间:
2016-5-13 17:13
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nailute1985
的帖子
7 C7 B/ W* Q }
0 v+ B8 F& {) k$ K5 j! E0 N
我那个就是污染，用解决污染的问题就行了
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-14 00:24
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lgfffancy
的帖子
6 M8 u6 V4 F* z0 G. O9 u( ~2 B
7 R8 m1 k2 k! V
我这个肯定不是
作者:
sithbj
时间:
2016-5-14 11:47
那些碎片是细胞残尸。是否污染，取些上清，加新鲜培养液。过夜，镜检。如污染，就会大量长出的。
作者:
wuhuaguo88l
时间:
2016-5-14 11:53
细胞死的太快了，是我不得不怀疑你的培养基是不是有问题，可以想象一下，细胞在十几分钟就开始破裂了，细菌污染是不会这么快的，你是不是加错了一些东西，如DMSO等引起细胞裂解的物质。
作者:
gxbzjznn
时间:
2016-5-14 19:39
不理解你表述的贴壁死亡是个什么概念？
作者:
奇幻雪蓝
时间:
2016-5-15 09:57
确定黑色的是死掉的PBMC的方法是什么？从图片感觉分离的PBMC纯度不高？不知道你测得纯度多少？
- K7 R$ `% d$ f; K9 N
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作者:
奇幻雪蓝
时间:
2016-5-15 10:06
十几分钟就鉴定出来了？这也太神速了吧，什么方法？
作者:
gjs
时间:
2016-5-15 11:29
第一组的试剂重新配，特别是可溶的OKT3，确定可溶的OKT3没问题。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-15 16:56
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奇幻雪蓝
的帖子
% F' f) J, n2 o4 F0 ~2 j* j
% t& \1 y' E' I+ U4 G, E
细胞形态啊，这马上就能判断是死的细胞啊。。。什么叫做PBMC分离纯度？本来PBMC就不是纯的细胞
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-15 16:58
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gxbzjznn
的帖子
! z/ D7 ^% c5 v! R
' y$ Z( c% x0 X8 K8 Q; v* y
贴壁的PBMC如果是活的话，折光度很好，而且只是不会移动而已，这个黑色的难道不是死了的细胞么？活细胞就算贴壁尤其是PBMC的话 也不是这样子的啊
- a4 v2 H8 n2 H8 Q1 H
作者:
我是传奇
时间:
2016-5-16 12:15
你说的这个应当是贴壁的，但不见得就是死了的，包被的会比较匀称，不会出现细胞过度集中的情况，可溶的媒介是什么，若果添加因子未混匀的话因子也会逐渐沉降（无论TC处理或未处理的容器），形成局部细胞浓度过高。逐渐会死，但不会你说的这么快。
作者:
quanquan326
时间:
2016-5-16 14:59
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我是传奇
的帖子
! Y. N$ H: a, j) ?
' q1 I+ o, b2 U! q$ P2 u
很对，赞同
作者:
momoenn
时间:
2016-5-16 16:57
你的细胞现在怎么样了
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-16 22:23
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momoenn
的帖子
! ]0 ~7 [8 u- Y2 w8 D
, Y+ |! s r& A* }
还行，不错
作者:
zwlcxx
时间:
2016-5-17 10:10
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nailute1985
的帖子
8 k! J4 h! a! ^! n2 L
3 V/ [+ P) W6 g7 R
您这两份细胞，第一张图应该是25倍物镜吧，能看出细胞碎片，可能是血浆里的成分，血浆是不是经过灭活后没有离心彻底？第二张图是4倍物镜，细胞密度略大，看不出瓶底的杂质。两份细胞看起来都是正常的。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-17 12:45
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zwlcxx
的帖子
! i( l6 E! ~3 X6 w5 J$ K: |
0 ]- x/ O1 `# n6 z4 s
两个都是10X 而且我没加血清，我用的是HSA
% T. p/ _9 S0 e# ~4 D, k
作者:
ALBERTSIGMA
时间:
2016-5-17 14:57
试剂问题吧。。不然不会死这么快的
作者:
ALBERTSIGMA
时间:
2016-5-17 14:57
试剂问题吧。。不然不会死这么快的
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