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标题: 脐带组织块培养法，原代传代i后第三天的细胞 [打印本页]

作者: 罗裙漫紫蝶香 时间: 2016-5-24 15:40 标题: 脐带组织块培养法，原代传代i后第三天的细胞

脐带组织块培养法，原代传代i后第三天的细胞，传代方法是，用移液枪吸走组织块，PBS清洗2边，酶消化，可是第二天细胞大部分都死了，只有很少部分贴壁，且已经铺展开来，分不清是不是间充质干细胞了，下图是继续培养至第三天的细胞( G% t; i, m, M) \; ^$ w; h
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作者: yingfeixiang 时间: 2016-5-24 16:11

怎么这个样子呢？你是不是胰酶消化时间太长了细胞死掉了，长的不好接种密度也有要求的，太少不行，你按多少接的

作者: 罗裙漫紫蝶香 时间: 2016-5-24 16:19

回复 yingfeixiang 的帖子) o4 P/ F l3 a

我没有计数，有4-5个集落种到6cm的皿中，显微镜下看密度也不稀

作者: 田甜 时间: 2016-5-24 16:50

亲，这是你上个帖子中原代细胞传下来的不？在你之前的那个帖子里，我建议你传代后换培养基：按你的图片，你的脐带间充质干细胞已经开始衰老了，传代时不换培养基的话，会继续衰老下去，就像你现在这个帖子发出的图片一样。 @' i, |3 m7 b2 A: u7 V$ Q
下次你再做原代的时候，注意血清换好一点的，一般还能养到P5/P6代，形态不错，血清不好的话，影响很大的，没有选到合适的血清，就挑选一款合适的无血清培养基或是间充质专用培养基，国产的也行的。; s; R6 f- I( P& J- W% `
合适的生长时间：原代生长时间11-15天，传代后3-4天能汇合至90%以上。

作者: 罗裙漫紫蝶香 时间: 2016-5-24 16:59

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亲，眼力真好，是上次那个帖子里的，我用的培养基是间充质干细胞的培养基，而且之前用来养过多种间充质干细胞，效果都好的，而且我要无血清培养，所以就没换，现在就养不起来了

作者: yingfeixiang 时间: 2016-5-24 19:40

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这个的按密度接种，你不计数不太好。个别可能因为个体差异导致长的不好，其它都应该长的很好

作者: 晗晗 时间: 2016-5-25 09:46

亲,这细胞都衰老死啦,建议还是别要拉,扔啦把

作者: 罗裙漫紫蝶香 时间: 2016-5-25 11:35

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今天第四天，已经长满了，我传代了又

作者: 罗裙漫紫蝶香 时间: 2016-5-26 11:59

回复田甜的帖子8 p# G4 D6 f5 {+ E* a

这是P2代的，感觉比之前的状态好啊
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作者: pcljsw2008 时间: 2016-5-29 20:31

第一张图老化感觉严重，第二张又好点，第三，四张基本正常，可能是密度有点低，胰酶浓度有点高

作者: gm3771052 时间: 2016-9-20 17:45

你好，我也在养脐带间充质，最近遇到一些老化的问题，能否交流交流？

作者: saliai2016 时间: 2016-9-22 10:30

回复罗裙漫紫蝶香的帖子 v' {' Q2 N, q" C! P! m

个人觉得还是细胞还是可以的，没多大问题

作者: 晗晗 时间: 2016-9-23 13:32

这个细胞都已经老化拉,再培养下去就像第四张那样.状态不在怎么好,你可以1:2传下试试,还有就是那个密度太大啦

作者: sfnana 时间: 2016-9-28 17:28

我觉得刚开始的细胞出现老化的现象是由于消化时间过长或者胰酶浓度过高造成的。后面细胞通过自我调节回复的还不错，但建议短期内提高换液的频率和及时补充需要的因子，在细胞状态恢复到最好的时候，传代，冻存。

作者: quanquan326 时间: 2016-10-11 13:30

感觉细胞的边界已经不大清晰，是老化了。控制传代时细胞的密度，以及胰酶的密度和消化时间。

作者: cgaxu870619 时间: 2016-10-14 10:02

之前的细胞应该是胰酶消化过了，不过细胞的自愈能力还是很强的，培养几天之后状态不错！

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