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标题: 免疫细胞培养前期细胞变少 [打印本页]

作者: yi080808 时间: 2016-6-6 13:22 标题: 免疫细胞培养前期细胞变少

本帖最后由 yi080808 于 2016-6-6 13:23 编辑 # m f1 M) K n2 j6 S3 O( {2 O8 h

免疫细胞在培养的第三天计数，都会比第0天的数量少，之后就会涨起来，这是为什么？是因为前期是细胞的滞后期吗？但是滞后期有这么久？

作者: sunny1352003 时间: 2016-6-6 15:18

接种时计数一般都会不准确

作者: 吕小松 时间: 2016-6-6 15:38

首先确保计数是否准确，第0天因为有不同类型的细胞的干扰，所以计数是不尽准确的，随着培养天数的增加，干扰的细胞会变少，那个时候计数才准确，希望楼主能考虑细胞的干扰和生长周期。) f* Y: n8 y7 y O3 U/ m
PS：还能养细胞的人真幸福

作者: 细胞之家 时间: 2016-6-6 16:46

一般来说，要想高纯度的获得某种免疫细胞，第一是在接种的时候，形成抑制其他细胞扩增或者杀死其他细胞的体系，亦或者在扩增的时候采用最利某种细胞扩增体系。
D0天细胞多，D3天，细胞少，这个是正常现象，D0天接种的时候，计的是总细胞，D3时计数是经过某种处理后，留下来的细胞。再加之在D0-D3这段时间，细胞属于调整阶段，也不进行增殖，所以细胞数量会少。

作者: lgfffancy 时间: 2016-6-7 09:34

在调整阶段有很多细胞死掉，稳定后的细胞数才是真正的细胞数

作者: fenlichong 时间: 2016-6-7 09:41

我认为，第0天的计数应该是包含有红细胞等别的细胞成分的，而在第3天计数时，目标细胞已在适宜的环境中增殖，增殖的数量大于起始分离的粗细胞，所以数量会增加，随着传代和培养时间的延长，培养条件的选择性压力利于最有活力的细胞生长，细胞逐渐均一化，最终形成相对较纯的细胞。

作者: ziyoufairy 时间: 2016-6-7 10:19

D0计数干扰项太多了吧，数据会不准。我的观察是D3细胞开始增值，D4开始能看到细胞明显增值，D5的时候细胞平铺70%左右。有段时间细胞长得特别快，D3能看到明显增值，D4就要传代了。细胞调整停滞期在我的实验室一般是1-2天。可能这个也与培养体系有关。如果分离时细胞数量本来就不够，接种密度不好的话，细胞起来会比较慢。

作者: fenlichong 时间: 2016-6-7 10:39

回复 fenlichong 的帖子
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一般培养的细胞在添加相应因子后，第三天应该就可以扩瓶传代了，楼主的细胞可能潜伏期较长，只有代谢和运动功能，无增殖。

作者: chenguangyu 时间: 2016-6-8 08:27

第零天的时候应该是细胞不纯，给你感觉细胞还挺多。也有些细胞可能因物理损伤等原因造成功能损伤活性较低在调整期死掉了。

作者: 只因偶然 时间: 2016-6-8 11:38

第0天计数的是提取的PBMC的数量，加入激活因子之后才开始诱导分化目的细胞，第3天的细胞计数是诱导分化之后增殖的目的细胞数，一般会比PBMC的数量低，具体少多少要看你诱导分化的是什么目的细胞，增殖速度快不快。所以第3天细胞数比第0天低是正常现象。

作者: 小刘 时间: 2016-6-8 12:04

这样的问题有以下几种解决方法，首先要确认计数是否准确，然后要在第二步分离后观察细胞的数量是否正常，能否达到接种要求；其次要观察细胞生长状态，到底是病人自身细胞问题还是你加的培养基有问题，如果你使用的培养基温度太低，或者培养箱的温度没有校准，也是比较低，这样细胞压根也长不起来，最后就是检测细胞是否收到支原体污染导致细胞生长受到影响。

作者: yi080808 时间: 2016-6-16 10:57

回复细胞之家的帖子

学到了，谢谢

作者: yi080808 时间: 2016-6-16 10:58

回复 ziyoufairy 的帖子, y1 h2 e! _' O8 L# ]

学到了，谢谢

作者: yi080808 时间: 2016-6-16 10:59

回复只因偶然的帖子) }# a; G" t" ?1 X$ T
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学到了，谢谢

作者: 随心盼盼 时间: 2016-6-17 17:32

刚提取出来的PBMC里面杂细胞很多，尤其是红细胞显得非常多，培养三天之后红细胞不增值，反而有数量衰弱迹象，而前期因为细胞因子的作用不是快速增值，所以前几天会觉得细胞长得慢甚至减少了。只要前期白细胞占比大，后期增值快就没问题。

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