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标题: 人脂肪间充质干细胞传代 [打印本页]

作者: wuht68 时间: 2016-6-28 10:43 标题: 人脂肪间充质干细胞传代

大家好，我培养人脂肪间充质干细胞，胰酶消化后1：3分盘，细胞稀、培养过程中有变大变薄现象，经过20多天的培养，细胞终于长到70%的汇合度，显微镜下细胞形态还不错（长长的成纤维状），但是细胞生长太缓慢了，不知生长缓慢是否和我胰酶消化传代时有关，我把我的消化条件写下来，能否请帮我看一下：
细胞为第三代人脂肪间充质干细胞
胰酶：0.25%胰酶+EDTA& ?8 F" C: f3 ~1 {1 D, |/ }
胰酶加到培养皿中，至贴壁细胞全部漂起，加完全培养液终止消化& l( r! ]' |, q7 F! O" W
1:3分盘（我接下来要调整为1：2）! o. {& |6 E. Y5 Q% d1 P' [; ^; @- \" o

能否提点意见，谢谢！

作者: 花饶然 时间: 2016-6-28 10:50

我们实验室通常用0.125%胰蛋白酶EDTA，效果也还不错。脂肪细胞的生长貌似与接种密度有关的，也有个体差异，不同供体能够传代的次数也不一样，出现老化的时间不同。不知道你养的第几代，传过几次。20天汇合70%，我没有遇到过

作者: wuht68 时间: 2016-6-28 11:12

回复花饶然的帖子, x( O! q. p7 {& `

非常感谢！5 f) c. r3 g" v
这个20天汇合70%的脂肪间充质干细胞是第3代，! c9 L3 ]: D6 c7 Y2 f9 l& C$ s- p
我当时1：3分盘的，细胞密度很低；4 q1 H. U! |+ Z. L/ G
另外，细胞生长缓慢不知是否和消化过度有关？

作者: 花饶然 时间: 2016-6-28 11:30

第3代按道理很低了，不太会出现这个情况。可能是细胞密度低的缘故吧，你下次把密度提高点吧，消化过度肯定也会有点影响。

作者: zhouweixing000 时间: 2016-6-28 15:25

贴壁细胞全部飘起了那就是消化过度了，因为贴壁的细胞不完全是干细胞，也有一些杂细胞是贴壁的！至于胰酶的浓度倒是没有太大的关系，这要看你的操作速度了，只要在你的可控范围内就行。1:3这个传代比例也是适合的，不要怀疑自己！

作者: wuht68 时间: 2016-6-29 09:58

非常感谢！

作者: 月_幻影 时间: 2016-6-30 13:28

本帖最后由月_幻影于 2016-6-30 13:28 编辑 $ v4 b0 b% A! U7 M# W* S

感觉楼主你消化的会不会有点过啊，一般加上胰酶待细胞变圆就可以加培养基终止消化了，然后吹打几下细胞就下来了，另外传代密度有点稀啊。

作者: 蛋蛋心月 时间: 2016-7-22 17:43

消化过头了，一般37℃放1-2min就好了。

作者: eric1993 时间: 2016-7-25 12:28

胰酶用0.05%的就可以了，浓度太高会影响消化程度，从而影响细胞状态

作者: 沙漠狐o0 时间: 2016-8-4 14:48

可否上几张图片看下细胞形态？

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