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间充质干细胞的流式检测
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作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-6 15:17
标题:
间充质干细胞的流式检测
看过一些关于脐带间充质干细胞的流式检测的文献，看到很多都是每个marker和CD45在同一管内进行检测。为什么不单独检测CD45为什么每个检测管都加入CD45呢？要是造血干细胞的话是为了圈定白细胞群可以理解。但间充质这么处理不是很理解；另外间充质干细胞的FSC和SSC的散点图中的R1门怎么圈定。造血干细胞的画群是先圈定淋巴细胞群。那间充质干细胞呢？
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-6 15:24
一，比如除去同型对照管外。举例三管。1.CD45-FITC+HLA-DR-PE+CD73-PerCP
+ ?$ M% f/ {' ~/ V$ T; ?0 ^
2.CD45-FITC+CD29-PE+CD44-FITC
: a2 a G5 g1 ^2 M0 X( P) v
3.CD45-FITC+CD34-PE+CD105-A（单阳管比较浪费）
0 g) a5 Q6 o. ~; F+ f9 P$ c9 ?
二，造血干细胞的分析前，在FSC/SSC散点图中，圈定中间偏底下那个淋巴细胞群。那间充质呢？直接圈定去除杂质和碎片之后的那一大片？
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-7 09:38
希望得到指导。帖子不要沉。
作者:
yingfeixiang
时间:
2016-7-8 08:38
间充质干细胞检测没管加CD45-FITC干什么，按表达的正常话，CD45-FITC表达小于2%的，按你说的protocol好像没什么意义，浪费抗体。另外做脐带间充质干细胞流式，这个是你培养的细胞吧，细胞成分单一，基本上在FSC/SSC散点图中（去除杂质和碎片后）都是间充质干细胞。
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-11 10:50
嗯。我们是P3代之后的脐带间充质干细胞。散点图那个我和您想法一致。造血干细胞的话散点图中需要画出淋巴细胞群。我是看了好几篇文献里都会加入CD45 我们以前做 没有每管都加CD45。也不知道这些论文里是什么个意思
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-11 10:50
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yingfeixiang
的帖子
6 ~6 L4 q2 Y2 o* B, l( v# j6 V
2 S' b: _; Z8 T, ?0 d& m$ u
嗯。我们是P3代之后的脐带间充质干细胞。散点图那个我和您想法一致。造血干细胞的话散点图中需要画出淋巴细胞群。我是看了好几篇文献里都会加入CD45 我们以前做 没有每管都加CD45。也不知道这些论文里是什么个意思
作者:
yingfeixiang
时间:
2016-7-11 11:37
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SKC-SFC
的帖子
# {5 V; l4 m; k* \! Z
+ s! N) }" j5 t9 Y& F* K& ^' a
不知道你看的是什么方面的文献，文献里面都加入CD45的话，是不是检测的是脐血里面的间充质干细胞含量？那也不对呀，也不应该标记CD45呀，这么做也不对呀，不明白呀。
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-12 09:36
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yingfeixiang
的帖子
- e! L% Z7 i* z% v
. }# I5 O9 `/ X% B) s+ z# I2 n* L d* H
您看看这个
# U: X8 H: D+ L$ K4 ~- G. K P
http://www.doc88.com/p-7456857376676.html
作者:
yingfeixiang
时间:
2016-7-12 10:47
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SKC-SFC
的帖子
4 W+ B* x c7 e, p7 E9 W
- d5 ]% h1 I( I0 Q6 [
看过了，按它这个方案也可以，浪费点抗体就是，4色的检测，方案复杂了点，设门的原理不一样
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-12 12:06
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yingfeixiang
的帖子
+ \3 i$ a5 U( G1 O' y% e" {3 p6 S; f' ~
0 `1 |$ N) ^. l4 Q
按文献这么做该怎么设门呢？谢谢
作者:
yingfeixiang
时间:
2016-7-12 13:49
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SKC-SFC
的帖子
0 B& w* B0 x9 i. U
0 \6 w* s7 D5 O/ Y, W$ q
他这个和咱们做的没什么区别，就是需要荧光补偿调节这繁琐点，散点图上和你之前做的一样，以前你是做两荧光的，这个是四荧光的。只是坐标组合不一样了
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-12 17:30
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yingfeixiang
的帖子
& {' g6 n1 f- s& K$ b# @
+ j+ T2 Q2 _% W
这个我懂了。谢谢
作者:
yingfeixiang
时间:
2016-7-13 08:27
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SKC-SFC
的帖子
- i2 K) u" K5 k; N
$ t+ ?/ ~4 R1 M7 a2 ?5 O
客气，相互学习
作者:
刘小明
时间:
2016-7-19 15:41
具体可以参照ISCT 的标准，CD45是为了排除造血系细胞的污染，具体是淋巴细胞；至于共同标记是为了更加准确，但个人理解单独加应该也可以的
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-29 09:16
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刘小明
的帖子
" k3 j$ i% y2 h# m
. Q2 ^- C/ F! x) w
单独加是可以就是管数更多。谢谢您的宝贵意见！
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-29 09:17
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刘小明
的帖子
N- I+ x: Q0 x% }
3 V! [* B: z: F8 x( G! {2 b
我知道CD45是排除造血的干扰。但同时都检测CD34和CD45貌似有点重复。文献中每个管都加入CD45感觉和我们之前的造血干细胞的方法一样？
作者:
SKC-SFC
时间:
2016-7-29 09:18
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刘小明
的帖子
5 K" ^( i* B. r2 n* d) F
- ~" M! M; S# n/ i8 h. X
因为我们这个是传代传到P6代的间充质细胞的是属于组织细胞了。为什么还每管都加这个抗体。这个浪费抗体的理由我实在不明白。
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