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标题: 间充质干细胞的流式检测 [打印本页]

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-6 15:17 标题: 间充质干细胞的流式检测

看过一些关于脐带间充质干细胞的流式检测的文献，看到很多都是每个marker和CD45在同一管内进行检测。为什么不单独检测CD45为什么每个检测管都加入CD45呢？要是造血干细胞的话是为了圈定白细胞群可以理解。但间充质这么处理不是很理解；另外间充质干细胞的FSC和SSC的散点图中的R1门怎么圈定。造血干细胞的画群是先圈定淋巴细胞群。那间充质干细胞呢？

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-6 15:24

一，比如除去同型对照管外。举例三管。1.CD45-FITC+HLA-DR-PE+CD73-PerCP
2.CD45-FITC+CD29-PE+CD44-FITC
3.CD45-FITC+CD34-PE+CD105-A（单阳管比较浪费）8 G3 k8 K7 Y% h+ L4 K2 r' E
二，造血干细胞的分析前，在FSC/SSC散点图中，圈定中间偏底下那个淋巴细胞群。那间充质呢？直接圈定去除杂质和碎片之后的那一大片？

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-7 09:38

希望得到指导。帖子不要沉。

作者: yingfeixiang 时间: 2016-7-8 08:38

间充质干细胞检测没管加CD45-FITC干什么，按表达的正常话，CD45-FITC表达小于2%的，按你说的protocol好像没什么意义，浪费抗体。另外做脐带间充质干细胞流式，这个是你培养的细胞吧，细胞成分单一，基本上在FSC/SSC散点图中（去除杂质和碎片后）都是间充质干细胞。

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-11 10:50

嗯。我们是P3代之后的脐带间充质干细胞。散点图那个我和您想法一致。造血干细胞的话散点图中需要画出淋巴细胞群。我是看了好几篇文献里都会加入CD45 我们以前做没有每管都加CD45。也不知道这些论文里是什么个意思

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-11 10:50

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嗯。我们是P3代之后的脐带间充质干细胞。散点图那个我和您想法一致。造血干细胞的话散点图中需要画出淋巴细胞群。我是看了好几篇文献里都会加入CD45 我们以前做没有每管都加CD45。也不知道这些论文里是什么个意思

作者: yingfeixiang 时间: 2016-7-11 11:37

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+ C4 D# D& ] [3 e
不知道你看的是什么方面的文献，文献里面都加入CD45的话，是不是检测的是脐血里面的间充质干细胞含量？那也不对呀，也不应该标记CD45呀，这么做也不对呀，不明白呀。

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-12 09:36

回复 yingfeixiang 的帖子2 ], z3 J6 y4 r' [
4 s* N. q, w, V& Y' C% T; |
您看看这个
http://www.doc88.com/p-7456857376676.html

作者: yingfeixiang 时间: 2016-7-12 10:47

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看过了，按它这个方案也可以，浪费点抗体就是，4色的检测，方案复杂了点，设门的原理不一样

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-12 12:06

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/ d! w, _% p1 \, b! h% f+ g1 ?, P
按文献这么做该怎么设门呢？谢谢

作者: yingfeixiang 时间: 2016-7-12 13:49

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: z; b. J0 c7 k$ e4 ?$ R+ |6 s* i
他这个和咱们做的没什么区别，就是需要荧光补偿调节这繁琐点，散点图上和你之前做的一样，以前你是做两荧光的，这个是四荧光的。只是坐标组合不一样了

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-12 17:30

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这个我懂了。谢谢

作者: yingfeixiang 时间: 2016-7-13 08:27

回复 SKC-SFC 的帖子; G# V9 l/ G% h' d
( t4 T) I" P/ v0 _( m: }
客气，相互学习

作者: 刘小明 时间: 2016-7-19 15:41

具体可以参照ISCT 的标准，CD45是为了排除造血系细胞的污染，具体是淋巴细胞；至于共同标记是为了更加准确，但个人理解单独加应该也可以的

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-29 09:16

回复刘小明的帖子* b/ n3 l/ q& u$ U) w+ k

单独加是可以就是管数更多。谢谢您的宝贵意见！

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-29 09:17

回复刘小明的帖子

我知道CD45是排除造血的干扰。但同时都检测CD34和CD45貌似有点重复。文献中每个管都加入CD45感觉和我们之前的造血干细胞的方法一样？

作者: SKC-SFC 时间: 2016-7-29 09:18

回复刘小明的帖子# u! ` X' `! n" z! Q( S
( u& g6 R# T: Y9 j m7 A, U9 g
因为我们这个是传代传到P6代的间充质细胞的是属于组织细胞了。为什么还每管都加这个抗体。这个浪费抗体的理由我实在不明白。

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