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标题: 成纤维细胞消化 [打印本页]

作者: Llxue 时间: 2016-7-20 10:56 标题: 成纤维细胞消化

昨天皮肤成纤维细胞传代的时候，用胰蛋白酶消化细胞，在显微镜下可见细胞已经形变至球形，只是还未脱落，马上终止消化，可是吹的时候怎么都吹不下来，明明已经消化至形变，为何吹不下来呢？哪位知道，请指点一下啊

作者: 2357710447 时间: 2016-7-20 11:49

回复 Llxue 的帖子: _- Z4 t# C, Z2 @( ?/ E* i
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消化的时候你需要用手轻微拍打瓶壁看到细胞脱落了就可以边拍打边在显微镜下面观察不要让他一直静置让姨酶消化姨酶对细胞是有损害的时间一般不要超过两分钟否则你计数出来细胞活率会降低（死细胞太多）对细胞的影响很大

作者: Llxue 时间: 2016-7-20 13:12

回复 2357710447 的帖子, G0 e5 t$ a9 Z$ ]( g5 i4 r
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嗯，就是怕影响细胞活性才尽快终止的

作者: yaolinzhang 时间: 2016-7-20 14:38

回复 Llxue 的帖子) X, N2 [. B9 o8 k' F9 D2 I- S: x
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其实你可以先用胰蛋白酶吹打细胞，待其脱落后再加培养液终止消化

作者: Llxue 时间: 2016-7-20 15:53

回复 yaolinzhang 的帖子/ R, N3 ?- z" O
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胰蛋白酶再吹打对细胞损伤应该挺大吧

作者: yaolinzhang 时间: 2016-7-20 17:26

回复 Llxue 的帖子1 ^: L1 P0 ]& V$ l- u, Z) H0 P
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没你想象的那么严重，你可以试试

作者: Llxue 时间: 2016-7-22 12:59

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好的，下次试试

作者: fuyinsheng 时间: 2016-7-25 11:43

轻轻拍打瓶壁会比较好震荡下来。, c* p0 J4 D0 W; J5 ^
同时想借助平台问下，我这边采购的皮肤成纤维细胞特别大，而且生长的很慢的用高糖DMSM加15%FBS养的，6-7天都长不满，采购来的时候是P4-P5代，请问有没有比较了解人皮肤成纤维细胞培养的，我想咨询下这个细胞一般能传多少代，是不是本身就很大，并不是因为老化才变大的。

作者: Llxue 时间: 2016-7-25 12:00

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我们都是自己提取的，最多养到P3代就不往后养了，成纤维细胞形态本身较大，但是具体的大小很少有文献报道，只要形态表型正常应该就没问题，另外，我们是用低糖的DMEM养的，一般2-3天就会增殖传代

作者: swtarron 时间: 2016-7-26 09:04

有两种可能：1、消化时间太短了，如果过多依靠外力使细胞从瓶壁脱落的话，一方面是不好操作，另外一方面细胞容易成团，也吹不散，如果收集细胞（传代、冻存等）之前要过滤的话，成团的细胞会被过滤掉，影响细胞的回收率；2、就是细胞状态不好，细胞长老了，也不容易消化。

作者: splinkerette 时间: 2016-7-27 15:00

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还是尽量避免直接用胰酶吹打，我的经验是用将培养瓶或者培养皿倾斜，用移液枪吸少量胰酶，在一定高度直接滴到细胞上，肉眼观察细胞是否被这种液滴冲下来。如果没有反应就继续孵育，反之就可以终止了。

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