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标题: 请教大家有关冻存液的事情 [打印本页]

作者: 刘小明 时间: 2016-7-22 21:07 标题: 请教大家有关冻存液的事情

请问各位同仁，冻存液最少加过多少？貌似这个没有个标注，谢谢大家浏览

作者: yeshch 时间: 2016-7-23 08:50

只要冻存液配得好，量一般问题不大吧，只要是冻存液与细胞悬液1：1就好了，我最少加过200ul，一般250+250或者500+500

作者: 阳光正暖 时间: 2016-7-23 09:51

根据细胞冻存浓度来确定冻存液的量

作者: 刘小明 时间: 2016-7-23 10:33

回复阳光正暖的帖子

能说的具体一些吗？

作者: maz_2008 时间: 2016-7-23 14:56

这个看细胞数了，想要保证好的冻存效率，细胞密度不能太低，冻存液的多少不是问题，只要DMSO，FBS和DMEM比例合适，都能work。一般好像推荐细胞的冻存的密度是10^7／ml？

作者: 芦苇浅 时间: 2016-7-24 09:58

我们一般直接配制含有10%的DMSO的冻存液，冻存细胞时直接用冻存液重悬细胞冻存。根据不同细胞类型，一般比较皮实的细胞，比如293 cells，DMEM：FBS: DMSO比例是7:2:1，但是如果冻存干细胞，一般用FBS：DMSO是9:1。

作者: swtarron 时间: 2016-7-24 10:49

一般DMSO的终浓度是10%左右，以前看资料说最低5%左右，但是没有试过。

作者: splinkerette 时间: 2016-7-26 10:44

回复芦苇浅的帖子7 g; Z% @5 }2 R6 y. D: ?

赞同，我们冻存干细胞的冻存液也是直接FBS：DMSO是9:1。配成冻存液后，取相应的体积直接重悬离心下来的细胞，再分装到冻存管里。

作者: niliu730323143 时间: 2016-8-25 09:02

最少加500ul，最多加过1ml，据我了解，还可以更大体积，不过我没试过，冻存管就2ml左右的容积。500ul比较合适吧，复苏时融解快些。普通细胞和干细胞均可使用FBS：DMSO=9:1，贵就贵些，但是很便捷，先预先配好，放在4度冰箱，效果很好。

作者: 2357710447 时间: 2016-8-25 09:28

冻存液的配置一般是终浓度为10%，但是方式不太一样，我用的是先配置成20%的DMSO，用的时候是先用等量的培养基先将细胞重悬，再加入等量的含有20%DMSO的培养基，为什么要这样做呢？很多人都没有考虑过这个问题，都是一味的按照人家的方法来做。细胞是很脆弱的，DMSO对细胞是有损伤的，先用培养基稀释细胞就是为细胞提供一个适应的微环境，不至于一来就受到DMSO的损伤，影响复苏的细胞活率，而且我做过实验，两种冻存方法复苏出来的细胞平均差距在5%左右，不信你可以自己去试试。DMSO放热的，配好之后先放到4度冰箱预冷备用

作者: 天狼星1919 时间: 2016-8-27 15:10

最少加过200ul，最多加过1ml，冻存密度的话最大时一个T25干细胞（大约600w）冻200ul，密度小的时候半个6孔板孔干细胞（大约100w）冻1mL。冻存液配置比例都是hESM：FBS：DMSO=7：2：1.
个人感觉冻存以后复苏结果好不好与这些关系不大，关键在细胞状态，细胞状态好冻很密复苏效果也非常好，细胞不行，全部加FBS和DMSO也没用。

作者: abc2613130 时间: 2016-9-2 08:50

我们冻存的时候没有用DMSO配制冻存液，因为DMSO对细胞是有损伤的。我们是用培养基：小牛血清为1:9，细胞直接用培养基混成细胞悬液。这样复苏的时候就不影响细胞活率。且复苏时不用离去上清，可以直接加培养基入瓶培养。

作者: LVXUEYAN1101 时间: 2016-9-6 13:44

DMSO：FBS=1:9，配好之后，直接用冻存液重悬细胞冻存即可

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