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标题: 请教干细胞传代是用胰酶消化和细胞刮哪种方法更有利于细胞生长 [打印本页]

作者: qinchuanniu 时间: 2016-7-25 19:51 标题: 请教干细胞传代是用胰酶消化和细胞刮哪种方法更有利于细胞生长

本帖最后由细胞海洋于 2016-7-25 20:37 编辑 1 B' m' w) e. i8 ], Y1 C( V) s+ f
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干细胞传代是用胰酶消化和细胞刮哪种方法更有利于细胞生长

作者: yinfuhua 时间: 2016-7-25 19:56

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选择胰酶消化会好些。但要严格掌握好酶的浓度和消化时间，否则也会影响细胞生长。

作者: fm001982 时间: 2016-7-26 08:43

一般都用胰酶，边消化边观察，很快就可以终止消化。
P1至P5代都是没问题的。

作者: swtarron 时间: 2016-7-26 08:55

一般都是用胰酶消化，刮的话，还真没试过……

作者: 2357710447 时间: 2016-7-26 09:02

现在的生物公司都是用姨酶消化 0.25%姨酶原液稀释一倍为0.125% 消化时轻轻拍打瓶壁边消化边观察不要静止消化时间不要超过两分钟消化完成立即用上清终止消化希望对你有用

作者: lgfffancy 时间: 2016-7-26 09:25

胰酶，记得稀释为0.125%，以及消化时间尽量短，不能持续消化。

作者: amyliu 时间: 2016-7-26 10:01

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你看是哪种干细胞，有的干细胞不适合用胰酶消化，例如诱导多潜能干细胞，你问的太宽泛了，要具体指出细胞类型，大家才能帮你

作者: splinkerette 时间: 2016-7-26 10:34

没有人推荐Accutase吗？相对胰酶要温和一些，对于细胞损伤小，而且细胞分离得很完全。最开始用的Millipore的，但购买起来不方便，现在一直在用Gibco的，感觉也不错。说明书上还特意说了不用离心，不用终止消化。

作者: splinkerette 时间: 2016-7-26 10:35

回复 lgfffancy 的帖子* s( V% E3 b) T% K
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我做的小鼠胚胎干细胞，用的都是0.05%。买的0.25%的，自己稀释了5倍

作者: shuimiao327 时间: 2016-7-26 16:46

用胰酶消化吧，没试过刮

作者: yinfuhua 时间: 2016-7-26 22:27

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谢谢！不是我问的，是“qinchuanniu”问的问题。只是问干细胞，具体什么干细胞没说。

作者: lgfffancy 时间: 2016-7-27 09:49

回复 splinkerette 的帖子) U; ], g N7 z# r
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完全可以

作者: qinchuanniu 时间: 2016-7-27 18:47

谢谢回复，学习了

作者: 121qwq 时间: 2016-7-28 09:00

回复 amyliu 的帖子% y1 L4 e; f0 u- }

ips不能，MSC可以

作者: yuxin727 时间: 2016-7-28 10:55

消化和细胞刮刀都使用过，对比来看，刮刀的损伤更大。胰酶替代物也使用过，确实方便很多，但成本高些。综合考虑还是建议使用胰酶，稀释使用就可以，我们一般使用0.125%胰酶。

作者: hitmanc 时间: 2016-7-29 14:55

0.125%胰酶，2~4分钟就可以。刮刀伤细胞

作者: wf78365421 时间: 2016-7-31 09:19

胰酶消化好些。

作者: 晗晗 时间: 2016-8-5 14:48

我们用的是胰酶消化的,没刮过

作者: Jiangshi90 时间: 2016-8-30 09:43

亲亲，你消化的是哪种干细胞呀？我们做的是诱导多功能干细胞，用EDTA消化即可，消化时间3－8分钟

作者: Jiangshi90 时间: 2016-8-30 09:49

回复 splinkerette 的帖子. x& A+ }" t( w: @

亲亲，请教一下，Accutase的消化原理是什么呀？

作者: 风倾颜 时间: 2016-8-30 10:01

用胰酶消化吧，胰酶用之前最好37度预热一下，消化的时候37度消化30s到1min一般就可以了，比较难消化的细胞时间可以稍微长一点，尽量不要超过2min，消化过度会对细胞造成损伤

作者: abc2613130 时间: 2016-8-30 15:40

我们都是用胰酶消化的，事先将胰酶预热到37度左右，有利于消化完全。

作者: splinkerette 时间: 2016-8-30 17:05

回复 Jiangshi90 的帖子

具体的原理也没深究过，只是protocol上都说的是有蛋白酶和胶原酶活性。附一个网上最常见的说明：
Accutase是包含有蛋白水解酶和胶原酶活性的一种细胞消化液，是胰酶/EDTA消化液的完美替换产品，用于从常规组织培养器皿和粘附培养器皿中消化细胞。适用于组织解离和细胞分离，因分离后的细胞能保持完好的表面抗原，且不含任何动物动物或者细菌来源组分，可满足对后续如细胞表面标记、病毒生长分析、流式细胞分析以及生物反应器相关检测等多种实验的要求。与传统的胰酶消化液相比，本品具有以下优势：1）适用于绝大多数原代细胞和哺乳动物细胞系的消化，以及昆虫细胞；2）温和有效的消化干细胞（hESCs和mESCs），冻存后细胞具更高复苏率；3）几分钟内实现粘附细胞的分离，不需清洗或中和反应，节省细胞传代时间；4）对细胞消化较为温和，能增加细胞产量和存活率；增强细胞贴壁效率；改善细胞形态和细胞生长特性等。

作者: bubble_w 时间: 2016-8-31 13:44

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你指的是小鼠的胚胎干细胞吧？如果是人的胚胎干细胞是不能用胰酶消化传代的，可以用细胞刮传代。如果是小鼠的胚胎干细胞或者iPS细胞，推荐用胰酶传代，尽量吹打成单细胞。如果使用细胞刮，可能会出现大的细胞团块，对干细胞的增殖有影响，并且容易出现分化。

作者: sfnana 时间: 2016-9-2 09:06

用37℃，0.125%的胰酶消化，1分钟左右，镜下观察（这是最重要的），及时中止消化。细胞刮对细胞的伤害特别大，不推荐使用。

作者: LVXUEYAN1101 时间: 2016-9-2 09:19

我用的是GIBCO家的细胞消化液，专门用于贴壁细胞消化，要比胰酶温和的多，还有CTS级别的

作者: UlissesJR 时间: 2016-9-6 09:14

用胰酶啊，怎么舍得用细胞刮对细胞伤害太大！！

作者: 修行 时间: 2016-9-6 15:53

酶消化吧，不过现在有了不用终止的消化酶，不用像原来那么麻烦了。

作者: edwardellen 时间: 2016-9-14 08:53

要是贴壁的细胞，当然还是要消化的好，0 {. K6 a7 T" u! c& ~( v0 s
Hyclone有一款胰酶替代品，价格和普通胰酶差不多，就是作用时间较长一点，/ M# Q- Y/ f$ B3 r( h1 |
无血清培养条件也可以用，不用加大豆蛋白抑制剂什么的，+ ^, g# y, a0 c0 q N
要是成球的胚胎干啥的，还是要用胶原酶比较好，
我是没听说谁用刮刀的，好像就是做免疫细胞治疗的有人用那个

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