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标题: 细胞治疗的T细胞，NK细胞大家分离人外周血PBMC后怎么诱导扩增培养的？ [打印本页]

作者: 920450509 时间: 2016-8-23 14:36 标题: 细胞治疗的T细胞，NK细胞大家分离人外周血PBMC后怎么诱导扩增培养的？

初次涉入细胞培养这一块，对于免疫细胞如何特异扩增单独培养一直都不是很懂，是PBMC先分离出来一直培养，达到一定数量后进行分选，检测，还是先将PBMC分离成不同类群的细胞，然后针对性地进行各类细胞的特殊培养？依据是什么？培养要求条件具体是？求大神指教。

作者: yingfeixiang 时间: 2016-8-23 14:47

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现在一般都是外周血分离出PBMC后，诱导培养。如果在进行分选或特殊培养费用很高，不做研究没有必要吧

作者: moluxingke 时间: 2016-8-23 15:39

看你的目的了，如果强调应用，那几乎都是诱导培养的，不然的话需要好多血才能分离出足够的你想要的细胞类型再继续进行培养的。如果是研究那就另当别论了。

作者: 细胞之家 时间: 2016-8-23 15:48

免疫细胞培养，比如T细胞、NK细胞、或者DC细胞，通常是抽取一定的外周血，通过密度离心，分离出PBMC，根据目标细胞，采取不同的诱导方式。
为了获得高纯度、数量多的细胞，可以采用包被培养瓶的方法，当然包被培养瓶的细胞因子，目的很简单，就是抑制其他细胞，诱导和激活目标细胞。处理后，就是扩增阶段，一般加入不同的扩增因子，比如NK至少需要IL-2，DC细胞需要GM-CSF、IL-4,等等。
有时候，对纯度有特别要求的，多采用磁珠筛选，这个费用高。
在此基础上，选择合适的商业化培养基，也是关键。

作者: 奇幻雪蓝 时间: 2016-8-23 16:37

激活是怎样一个过程？细胞培养的整个过程是先激活再扩增，还是边激活便扩增？

作者: yingfeixiang 时间: 2016-8-23 16:56

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是先激活之后在扩增的

作者: 奇幻雪蓝 时间: 2016-8-24 08:11

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激活需要多久？激活后，在显微镜下观察细胞有特殊的形态么？和激活前有什么不同？

作者: yingfeixiang 时间: 2016-8-24 08:56

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多久？就是加入活化液（刺激因子），没什么特俗的

作者: Liyun65 时间: 2016-8-24 09:09

回复奇幻雪蓝的帖子* Z( [: j7 Y& t9 ^: F2 ~

就我培养的细胞看来，前期细胞都比较园，到后期CD56+、表型比较多的时候，会有很多长梭形的细胞。

作者: 大少爷 时间: 2016-8-24 09:19

看文献所有问题都解决了。

作者: 生物太次郎87 时间: 2016-8-24 11:16

抽取80ml左右外周血，通过ficoll密度离心，分离出PBMC再接种，接种时用T75培养瓶（瓶底包埋CD16），用前用生理盐水清洗3次（注射器吸取打到底面对着那个面，防止把包被的CD16冲掉），接种总体积设为V，加入诱导分化因子（10%）、自体血浆（5%）、淋巴细胞无血清培养基（85%）。培养72h后全量换液，换液培养基还是淋巴细胞无血清培养基，之后每隔2-3d换液一次，添加5%的增殖因子，后续培养。

作者: niliu730323143 时间: 2016-8-25 09:05

你们的PBMC是怎么培养的？

作者: 海螺天空 时间: 2016-8-29 12:44

刺激因子一般是先包板，真正开始扩增是在四天之后了

作者: 伊诺强 时间: 2016-8-29 13:29

分离出PBMC后，根据需要直接特异性诱导培养

作者: LVXUEYAN1101 时间: 2016-8-30 09:30

做科研的话可以分离出PBMC之后进行分选然后再陪养，但是分选造价会比较高；要想成本低点，那就分离出PBMC之后进行诱导培养

作者: niliu730323143 时间: 2016-9-2 08:36

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这是贴壁的吗？

作者: kaiyou 时间: 2016-9-3 22:41

抗体包被诱导激活扩增

作者: wozuixie 时间: 2016-9-4 12:28

抗体包被诱导激活扩增

作者: niliu730323143 时间: 2016-9-18 10:55

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有没有文献可以推荐？

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