干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 请问胶原酶I型或者V型消化组织需要加血清吗？ [打印本页]

作者: 121qwq 时间: 2016-9-27 08:53 标题: 请问胶原酶I型或者V型消化组织需要加血清吗？

请问胶原酶I型或者V型消化组织需要加血清吗？我看有些文献是用10%的血清，有些文献不需要用，为什么？

作者: UlissesJR 时间: 2016-9-27 09:49

我们消化组织没加过血清，不知道为什么要加呢？

作者: sfnana 时间: 2016-9-27 15:40

加血清目的是为了中止消化吧，用胶原酶消化的时候，因为胶原酶的作用比较温和，一般在消化结束的时候不需要加血清中止消化，只要过滤离心就可以了。

作者: chutu21 时间: 2016-9-27 17:59

对胶原酶消化没什么作用，但血清对维持细胞稳定有作用，尤其是长时间消化时

作者: angelocream 时间: 2016-9-28 09:12

胶原酶消化不会被血清终止，而且血清有保护细胞的作用，所以在原代培养的时候为了保证细胞的生存率，我一般都会加FBS，记住是FBS而不是病人自体血清

作者: wf78365421 时间: 2016-10-2 12:12

不用加

作者: 我的小宝贝 时间: 2016-10-7 11:26

我们是不加的，不知道为什么要加呢？保护细胞外，还会终止酶的消化作用吧。

作者: chutu21 时间: 2016-10-7 21:31

血清中含有胰蛋白酶抑制剂，所以用胰蛋白酶消化细胞时可以用血清来终止反应。胶原酶则不受血清抑制。

作者: 风倾颜 时间: 2016-10-8 09:26

不需要，用胰酶消化时加血清是因为血清中含有胰蛋白酶抑制剂，能够终止消化。而用胶原酶消化的时候，血清并不能终止胶原酶的消化，由于胶原酶硝化作用比较温和，消化结束的时候过滤离心就可以了。

作者: qinchuanniu 时间: 2016-10-11 08:54

回复 angelocream 的帖子) g0 [ v* G& N5 @4 P. b: M6 C( [

加FBS会影响后边的临床应用，残留的FBS中BSA，也没有简便敏感的检测方法，这样的生产的细胞未必能通过严格的药监审核

作者: angelocream 时间: 2016-11-25 15:55

回复 qinchuanniu 的帖子

比如软骨细胞的消化时间是17h以上，有些组织消化时间更久，FBS能起到很好的保护作用，而且在特别的胶原酶的说明书上也有写需要加FBS。关于FBS残留的问题，FDA有一个详细的标准

作者: 免疫与细胞 时间: 2016-12-21 08:36

不需要加，我们在做消化时从未加过，如果要终止消化，对胶原酶进行稀释离心去除就可以了。

作者: sfnana 时间: 2016-12-21 09:52

长时间消化的时候最好加一点，可以保护细胞，短时间消化，不需要加。

作者: 蒋佳焕 时间: 2020-5-3 21:05

angelocream 发表于 2016-9-28 09:12 . c' L3 N' `' w% X
胶原酶消化不会被血清终止，而且血清有保护细胞的作用，所以在原代培养的时候为了保证细胞的生存率，我一般 ...

# i: d9 P, z5 \; H
谢谢，终于解惑了* R1 n2 g! O" `
我也是做原代，用的胶原酶
师兄师姐都说血清会抑制酶的活性& B" ]' K! a' F$ C0 i. l- }
但是不加血清的话长时间消化后细胞活性很差

作者: 蒋佳焕 时间: 2020-5-3 21:12

angelocream 发表于 2016-9-28 09:12 9 E, }2 ^+ `/ a
胶原酶消化不会被血清终止，而且血清有保护细胞的作用，所以在原代培养的时候为了保证细胞的生存率，我一般 ...

学长，不知道你还看不看得到，请问你原代消化的时候还会添加双抗防止污染吗？是1%浓度吗？因为完全培养基也是这个浓度，所有不会对细胞产生太大的影响吧

作者: 15558156935 时间: 2021-5-8 15:36

消化过程一般不加双抗，因为双抗消化过程对细胞也是有一定损害，一般在培养过程会加1%双抗

作者: Demon_CN 时间: 2021-10-13 11:15

一般不需要加FBS，如果消化浓度低时间长，隔夜那种，细胞又特别珍贵需要尽可能提高活率，建议还是加，7 K0 E( d4 P) G5 X5 k# D
细胞消化成单个或者小群体还是需要能量消耗的，有可能会受损。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)