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标题: 细胞复苏需要离心吗？ [打印本页]

作者: zhx1912 时间: 2016-10-20 15:55 标题: 细胞复苏需要离心吗？

我养普通细胞一般都是直接复融后加到新鲜培养基中，不离心
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养饲养层MEF细胞以及ES细胞也可以不离心直接复苏吗？

作者: sunny2829 时间: 2016-10-20 16:04

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我们一般复苏细胞都离心除DMSO，因为DMSO具有毒性，对细胞有一定损伤。1 i _ I% y4 v3 J; G# c5 ?0 ^
个人建议能离心还是离心吧。

作者: yingfeixiang 时间: 2016-10-20 16:13

复苏细胞一般都离心除DMSO，因为DMSO具有细胞毒性，对细胞有一定损伤。特殊要求除外

作者: baby00000003 时间: 2016-10-20 16:49

有些个细胞复苏培养，不讲究的时候可以不除DMSO，或者用的是不含DMSO的高级冻存液，就不用离心啦～3 ?: {# _, q: x
至于你说的这些，可以试试看嘛～也许就能出一套新的protocol～

作者: watchen198891 时间: 2016-10-20 16:50

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对于MEF细胞，可以离心也可以不离心，两种方式，如果不离心，就要在细胞接种后加入少量培养基，培养4-6h后换液，补充新鲜培养基。对于ES饲养层培养，必须离心，但是离心转速以及时间尽量减小，避免对ES过度伤害。

作者: zhx1912 时间: 2016-10-21 08:31

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谢谢你的建议！我认为离心对细胞损伤大过DMSO的毒性，所以对于贴壁细胞一般是复苏后换液

作者: zhx1912 时间: 2016-10-21 08:32

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还有不含DMSO的高级冻存液，能告诉我品牌和货号吗？想了解了解，谢谢了~

作者: zhx1912 时间: 2016-10-21 08:33

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谢谢！

作者: zhx1912 时间: 2016-10-21 08:38

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这个毒性是对于细胞长期的生长有毒性还是仅仅在复苏后的几代有影响呢？我养细胞的习惯是贴壁细胞复苏时不离心，复苏后24小时换液；悬浮细胞直接复苏，DMSO被稀释到0.5%，细胞生长达到丰都后再稀释传代，DMSO已经接近0含量了。细胞生长以及活性方面都挺好的# F. i; f0 k) X" |) @2 [+ j, z* r3 [

养细胞也有很多年了，一直都是这样操作的，只是最近接触干细胞，好多细节不是太明白，想向大家多了解了解- K6 v( i2 m9 t: h k$ }

作者: baby00000003 时间: 2016-10-21 08:49

回复 zhx1912 的帖子% {: p# z! ~# D) X

http://www.zenoaq.jp/cellbanker/en/stem-cellbanker-dmso.html! x; p9 m+ f- [$ ?4 t. ^
比如说这俩吧，曾经有人跟我推销过，未亲测

作者: yinchong42 时间: 2016-10-24 00:25

我感觉，如果细胞量比较少或者细胞比较脆弱容易死，那么建议还是不离心，复苏以后多加两倍的培养基，DMSO稀释到0.5%-1%的情况下对细胞的杀伤毕竟有限，

然后依照细胞的贴壁速度而定，像有些细胞比如MC3T3-E1之类的细胞，2个小时就基本上倒不掉了（不过我还是会等到三个小时，因为按照我的经验，如果每次都刚刚贴壁就把细胞倒掉，长此以往，不易贴壁的那部分细胞就会被淘汰掉，这样就会影响细胞株的形状了），这时候直接换液就行，然后过12小时再换一次液，这次换液以后，一般来说细胞生长状态都不会太好，这时候等细胞密度到70%左右时，把细胞消化下来重新贴一次壁，长满了再传代之后就可以用了，，，

作者: zhx1912 时间: 2016-10-24 11:49

回复 baby00000003 的帖子3 B( ^6 ^ c u- v( P/ }+ [

非常感谢！

作者: splinkerette 时间: 2016-10-25 20:36

我觉得离心对于细胞的损伤应该不大吧，毕竟每次传代都要离心一次。。。如果离心这个操作本身都对细胞有损害，岂不是细胞在一直变差？9 G; l- w( _7 F$ b9 v, r$ J
我还是认为应该要离心的，把DMSO去除干净，干细胞相对于肿瘤细胞更加敏感

作者: zhx1912 时间: 2016-10-26 09:46

回复 yinchong42 的帖子- E7 M) z& E" f. c

很好的经验分享，谢谢！

作者: zhx1912 时间: 2016-10-26 09:48

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谢谢！

作者: 晗晗 时间: 2016-10-26 10:47

不可以吧，细胞复苏都需要离心的，因为DMSO有毒，对细胞有损伤，所以一定要离心

作者: 天龙八部 时间: 2016-10-26 15:45

普通细胞复苏后直接加新鲜培养基，第二天换液。: o4 q3 J2 _- t$ z+ {
干细胞和MEF都先离心去除DMSO，没试过直接加培养基。

作者: zhx1912 时间: 2016-10-27 09:07

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OK，谢谢了！

作者: chrcs 时间: 2016-11-9 13:12

一般会离心去除DMSO，DMSO对细胞具有一定的损伤性

作者: 晗晗 时间: 2016-11-29 09:16

当然需要离心啊，因为DMSO有毒，离心的时候可以把DMSO除去，否则会影响以后细胞的培养

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