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标题: 请教各位专家免疫细胞冻存复苏后活率太低是咋回事？ [打印本页]

作者: woshibotao_01 时间: 2016-10-31 12:29 标题: 请教各位专家免疫细胞冻存复苏后活率太低是咋回事？

实验室液氮冻存的CIK和NK复苏后，活率才50-70之间，还不知道这样复苏的细胞活力会不会受影响0 S2 X% T1 _6 n& V! j5 n
冻存液是10%二甲基亚砜、右旋糖酐、培养基、20%血清，冻存密度大概每毫升2*10的7次方，是经过-80程序降温的然后进的液氮

作者: ccfc 时间: 2016-10-31 13:51

有可能是细胞本身状态不太好，或者细胞复苏时的操作影响了细胞活率

作者: 浅浅的花花 时间: 2016-10-31 13:59

冻存应该在细胞生长状态比较好的时候冻存，大概的判定是增殖比较快，比较直观的指标：显微镜下细胞折光性好，比较亮，背景干净，没有太多的细胞碎片和释放的细胞内容物；另外冻存液配置好后，一定在4℃放置半小时，因为DMSO常温下对细胞损伤比较厉害；低温影响不大，程序性冻存的话，我们一般是4℃10min中，-20℃半小时，然后-80过夜，然后液氮；用程序性冻存盒提前放到4℃；复苏前先把洗涤培养基准备好，尽量的减少在冻存液的时间；大概就这些吧，总之一句话——-细节决定成败！希望对你有所帮助( ^- u! N9 e9 ?# i3 r8 `5 u: S

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