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标题: 小鼠脂肪间充质干细胞 [打印本页]

作者: sports123 时间: 2016-11-3 18:22 标题: 小鼠脂肪间充质干细胞

求问，有没有人做过小鼠脂肪间充质干细胞提取的。! U6 s: c: B/ ?
我们的方案如下，. d1 g2 s; D4 i% C, E/ z) @( `
将脂肪组织剪碎，用含有双抗的 PBS 充分冲洗干净；添加胶原酶，在 37℃水浴箱中孵育 30—90min，加入胎牛血清终止消化；离心后通过 400μm的细胞筛，过滤掉未消化的部
分，然后低速离心；离心后试管中的沉淀既离心后试管中的沉淀即 SVF。 SVF 是一种由多种细胞组成的细胞群，包括循环血细胞、成纤维细胞、周细胞、内皮细胞和 ASCs等；将 SVF 在红细胞裂解液中冰上孵育 10min，用含有双抗的 PBS 冲洗，离心后接种到条件培养基中培养。在条件培养基中粘附性细胞群即脂肪间充质干细胞。我们用这种方法，培育一段时间后，发现细胞的数量好少啊！！求问，该怎么解决。

作者: zwlcxx 时间: 2016-11-8 11:44

充分清洗并剪碎组织后，低速离心后弃上清，沉淀加等体积胶原酶，震动水浴1小时。用少量血清终止消化，低速离心，沉淀可直接用培养基重悬后接种。（培养瓶可以用血清包被6小时以上，使用前用培养液洗两遍）

作者: sports123 时间: 2016-11-8 17:00

回复 zwlcxx 的帖子! Y3 o% W; @. `6 Y% v" D* g. |

请问，你们震动水浴1小时，温度是37摄氏度吗？还有低速离心的转速是1000转/min吗？养细胞新手，请多多赐教》

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