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标题: 细胞复苏解冻问题 [打印本页]

作者: fm001982 时间: 2016-11-7 09:34 标题: 细胞复苏解冻问题

最近接收了一批寄存细胞，下了液氮后在做复苏。但细胞冻存液融化的时间接近2分钟了，冻存液的量在1.5毫升，水浴锅的温度调到了39度。不知道各位有什么办法能让解冻时间控制在一分钟之内？

作者: cxs 时间: 2016-11-7 10:08

无非就是在水浴里多晃动，如果还是不行，我想主要问题并不在温度，而在于你的冻存量太大了，一分钟比较难全融。我们一般一管也就冻个0.5到1ml的量。

作者: lgfffancy 时间: 2016-11-7 10:10

很简单
复苏的时候不断摇晃冻存灌就OK了。/ c2 [7 v6 W' K9 A4 b9 E
你是新手吧

作者: 莫邪小仙 时间: 2016-11-7 10:30

使劲晃吧，不过冻存量在1.5min的话很难在1min内溶解

作者: fm001982 时间: 2016-11-7 10:44

再使劲也没用，估计是量的问题

作者: dollar007 时间: 2016-11-7 13:59

提高复苏温度吧，尝试下42度，注意一解冻完就要终止。

作者: gxbzjznn 时间: 2016-11-7 21:37

其实我个人认为不必完全融化，可以剩豌豆大小时候就从水浴锅里面拿出来，毕竟你从水浴锅拿出来喷上酒精再擦干再用移液枪洗出来到离心管还需要一些时间。

作者: fenlichong 时间: 2016-11-8 18:26

1.5ml冻存液有点多，全溶解的话花的时间也长，建议加大冻存密度，减少每管冻存液添加量。

作者: sfnana 时间: 2016-11-9 09:02

可以再提高一点水浴锅的温度，40度，因为你把冻存管放进去，在冻存管周围的水温度会降低，另外在水浴里多晃动一下，冻存的量有点多，1分钟化不完，控制在2分钟-3分钟也是没有问题的，我们试过，不影响，毕竟冻存的体积比较大。还有就是水浴时间久了的话，不必完全化完，还剩豆大的冰碴时就可以拿出来了，等你喷喷酒精，擦拭一下，准备开始实验的时候，就全部化完了，时间刚刚好。

作者: xieyun20052005 时间: 2016-11-9 14:30

对，一般40度也是么问题的，而且即使一分钟化不完也问题不大，而且下次你可以将细胞密度调整的稍微大一些，

作者: LVXUEYAN1101 时间: 2016-11-9 14:54

不停的晃动解冻就可以了

作者: dongxin 时间: 2016-11-10 08:57

回复 fm001982 的帖子3 w: s* j: L0 b8 _
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在37度的水浴里，用镊子夹着不停的晃动，就可以呀。待有一小块小冰晶时消毒转移至超净台中进行下面的操作。供参考

作者: fm001982 时间: 2016-11-10 09:05

回复 dongxin 的帖子! i$ m0 ^; u. z0 K5 d/ U

我用的39度，用的手摇动，摇的的力度也不小，出现液体的时间大概在80秒，只要出现液体溶解就很快了，但是就是前边融的时间稍长，还没解决办法。

作者: yingfeixiang 时间: 2016-11-10 09:08

回复 fm001982 的帖子

就是在水浴里多晃动

作者: ccfc 时间: 2016-11-10 09:10

提高温度到42度，大部分融化了留有一个小冰块就可以准备操作了，操作时基本都融化了

作者: fm001982 时间: 2016-11-10 09:11

本帖最后由 fm001982 于 2016-11-10 09:23 编辑 ; P% d# f) x) f7 w3 {4 g# y) W; C

谢谢大家的建议，下次我把温度提高到42度，在水浴锅的不同位置晃动试试。
一个小小的步骤，还是有很多细节，经验很重要，水很深啊

。

作者: dongxin 时间: 2016-11-10 09:45

回复 fm001982 的帖子( G) P' t1 m$ ~5 d! t( n
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我之前参加过某干细胞库的培训，那里的老师建议取出的冻存管在手心里戳一下，用双手手心（意在去掉表面的霜）。再放到水浴锅里晃动。如果都不行，建议你冻存的液体减到1mL试试。

作者: fm001982 时间: 2016-11-10 09:47

回复 dongxin 的帖子. V1 Q* H( _9 t0 w/ g7 H

嗯，确实有道理，但说实话，-180度，很冰啊。单层手套，档不住冰冻的感觉。

作者: 杏色玻璃 时间: 2016-11-10 10:05

水浴锅中加快摇晃速度，融化80%左右就可以拿出来准备加入培养基离心了，不必要等到全部融化。之后自己冻得时候就体积控制在1ml内吧

作者: 免疫与细胞 时间: 2016-11-10 10:51

解冻时摇一摇，温度最好别提高。不用全部解冻，80％~90％就可以了。实在想解冻快就换冻存管，换个大的。

作者: dongxin 时间: 2016-11-10 11:20

回复 fm001982 的帖子) O* E$ J5 H0 r/ R0 R0 ?- T
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的确很冰，我记得当时培训的老师交大家，就是用双手戳几下，然后放入水浴锅中，摇晃起来

作者: leizi 时间: 2016-11-10 11:32

回复 fm001982 的帖子 {% }; _! L6 b) n: P( U6 @. M

你的量有些大，不过多用些力量晃还是能够加速溶解的，至于能不能到1min就溶解了，还要你试试

作者: fm001982 时间: 2016-11-10 12:26

再次对大家的建议和帮助表示衷心感谢，虽然是小问题，但我会用心记下，并传播给更多的人~

作者: niliu730323143 时间: 2016-11-10 16:14

温度调高，40-42度应该都没问题，使劲晃，看到还有一点小冰粒就拿出来。建议冻存时500ul冻存足矣。

作者: UlissesJR 时间: 2016-11-14 10:53

冻存体积小一点，一般1ml，复苏温度42度

作者: qinchuanniu 时间: 2016-11-14 20:24

复苏时注意的问题1、提前最好各项准备，如将细胞洗涤液预温后，加在刻度离心管内，放在超净台内；2、解冻时水温39-40度，水量要大一些，1个冻存管可用200-300ml的水；3、待冻存管内细胞液部分已解冻，用毛细滴管吸入预先准备好的细胞洗涤液中吹吸几次使全部解冻，4、整个操作控制在1min内。这样可最大限度的保存细胞活性。

作者: 吃呆猫 时间: 2016-11-18 14:43

摇晃冻存管，加速溶解，还就是并不是一定要全融，可以融到剩一点小冰晶

作者: ccfc 时间: 2016-11-18 16:51

我们冻存的量也会在1-1.5ml，一般是42度解冻，在水里多晃动一下，当解冻至剩下一小粒冰块时，拿出来，用酒精消毒后开始操作，这时冰块已经融了。解冻的时间2分钟以内，解冻后细胞活率也比较高

作者: feifangli 时间: 2016-12-14 14:54

我们每管冻存1.5ml，复苏时基本也要2分钟。

作者: zhu1019 时间: 2016-12-15 11:08

解冻的时候要快速晃动冻存管，解冻还是很快的，另外建议冻存时减少每管冻存液体积，可适当增加冻存密度

作者: gscao 时间: 2016-12-16 08:20

迅速摇晃冻存管就行了，竟可能快，如果还不能快速融化，只能说明你的冻存液加多了，冻存液一般不大于1ml，DMSO含量占10%
。

作者: liuyanly35 时间: 2016-12-21 20:08

超过一分钟也没有多大问题的，复苏的时候要求尽可能的快。尽力而为吧。

作者: 紫风铃9897 时间: 2017-7-7 16:35

cxs 发表于 2016-11-7 10:08
/ p& S |* Z. k4 C. ]8 u. ]9 r0 _无非就是在水浴里多晃动，如果还是不行，我想主要问题并不在温度，而在于你的冻存量太大了，一分钟比较难全 ...

这个很实用，谢谢，学习了

作者: yzc937168 时间: 2017-7-11 10:51

将培养基预热，加一部分进去

作者: laputa12 时间: 2017-7-11 14:44

冻存液少一点，温度我觉得不要超过37

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