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标题:
扩增一个基因的片段扩增不出来
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作者:
微笑流滢
时间:
2016-11-21 23:56
标题:
扩增一个基因的片段扩增不出来
是怎么回事呢？成弥散状！
[img][/img]
作者:
niliu730323143
时间:
2016-11-22 09:11
重新设计引物
作者:
细胞海洋
时间:
2016-11-22 12:11
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微笑流滢
的帖子
& D o% {3 [$ U& G- X5 o: o
3 O }& {1 P9 X7 J& e6 r' I( Q! H2 R
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+ o% n' F, W/ h* W0 t1 |
单个图片不要大于1000kb
作者:
微笑流滢
时间:
2016-11-22 13:50
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niliu730323143
的帖子
' `, a2 |& ]0 B: W
. t0 ]% J( g0 Z7 ?
重新设计了两对，而且也用梯度PCR扩增了，也是弥散，模板也换了
作者:
微笑流滢
时间:
2016-11-22 13:56
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微笑流滢
的帖子
^$ A0 j N; \
1 R d I3 i6 V. c1 i8 r( E
这是图片
图片附件:
QQ图片20161121235332.jpg
(2016-11-22 13:56, 426 KB) / 下载次数 386
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=ODE3NTl8MDBjNjg5ZWV8MTc5NDQ4MjkwMXww
作者:
niliu730323143
时间:
2016-11-25 11:27
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微笑流滢
的帖子
5 s' _8 m- U' o$ h7 `$ n' L
7 R# h1 [0 M0 c
引物的GC含量，退火温度，延伸时间，这三个注意下，看看你自己的酶有没有失效啊。
作者:
gscao
时间:
2016-11-28 08:43
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微笑流滢
的帖子
: n* h" b& M! z( N
3 \; [5 d/ \8 l* j: R+ P
换好使的Taq酶，可能会有效果。
作者:
innatestem
时间:
2016-11-28 09:30
针对你的问题，给你几个建议：一.重新设计引物；二.多选取几种不同的模版；三.使用扩增性，保真性更好的 DNA聚合酶（我们一般用的是全式金公司的Fast Pfu，Takara公司的DNA聚合酶）；四.你扩增的目的基因是否具有一些特殊结构，或者具有高GC含量，这种情况下建议你选用适合高GC含量模版的DNA聚合酶（Takara公司有适用于高GC含量的DNA聚合酶）。祝好！
作者:
微笑流滢
时间:
2016-12-25 22:09
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innatestem
的帖子
& V2 V2 u5 s. ^( l
0 v5 R4 B& s. m" W0 ^7 M
亲，这个基因是高GC还有一些重复序列，，该如何扩增呢？只需要扩增这个基因的2000bp就可以了，但是一直扩不出来。也买了公司的适合于扩增高GC的酶，但是这个酶有自己的PCR程序，我试了试，还是啥都没有，我就用常规的PCR程序试了试，还是不行，崩溃
作者:
innatestem
时间:
2017-1-2 00:08
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微笑流滢
的帖子
* p1 ^7 u s8 l. p& s/ c j1 ]
# {* V& ^. a8 u4 b; b% q: G* f
建议你分段P，最后再拼接出全长的片段。
作者:
innatestem
时间:
2017-1-2 00:08
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微笑流滢
的帖子
/ q2 d+ x7 E7 s' i
6 |. M* d# b' C% g. X" c
祝好！
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