干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: NK扩增遇到的问题，求解 [打印本页]

作者: Liyun65 时间: 2016-11-22 10:40 标题: NK扩增遇到的问题，求解

最近在筛选人外周血NK细胞扩增的方法，遇到一些问题。不知道大家养NK细胞种的细胞浓度是多少。
目前遇到的问题是：0天分离PBMC，然后加入OKT3、IL2、IL15第4天离心去除OKT3。但是，第4天观察到细胞结团了，却没有增殖，细胞很小，不知道是不是细胞皱缩变小了，还是死了。

作者: gondobar 时间: 2016-11-22 11:46

细胞皱缩变小？我很好奇！养NK加OKT3，我也很好奇？文献确是有，但是OKT3对T刺激作用很强，如何保证NK纯度！细胞培养，尤其是这种复杂细胞，扩增前几天细胞变少是很正常的。

作者: honey棉花 时间: 2016-11-22 13:09

NK细胞成集落生长，刺激比较好的细胞教未刺激的偏大，在前期培养细胞总数会有所变少，但在后期会大量增殖。
你可以取部分细胞做个台盼蓝染色，检测一下细胞的活率

作者: ltickp 时间: 2016-11-22 13:42

NK体外培养会有细胞结团的现象

作者: 伊诺强 时间: 2016-11-22 15:24

你这个培养体系本身就有问题，我估计是不会成功的。纯因子刺激的NK细胞培养还是有一定的难度的，各家多少有些区别，但是可以肯定的是你这个体系估计不行

作者: sky512829 时间: 2016-11-25 16:59

进来学习培养

作者: xieyun20052005 时间: 2016-11-27 11:10

体系很重要，体系不对功夫白搭

作者: Liyun65 时间: 2016-12-15 11:49

回复伊诺强的帖子
) l6 e/ U- S$ n* W
不知道你们是怎么样子做的呢？

作者: liuyanly35 时间: 2016-12-18 11:23

OKT3是养CIK细胞的。不是针对NK细胞的。

作者: lihaifeng 时间: 2016-12-19 13:01

第4天没有增殖很正常，你这个体系估计5到7天才会增殖。细胞成团代表他将要增殖，可以再观察几天再说。

作者: wuhuaguo88l 时间: 2016-12-19 14:39

正常，集落会有些半贴壁，过两天就会脱落出来

作者: 鑫鑫向荣 时间: 2016-12-19 17:27

回复 lihaifeng 的帖子
( Q2 l2 |+ e' z$ A
怎样可以使NK很快活化并大量增值

作者: 鑫鑫向荣 时间: 2016-12-19 17:28

回复 Liyun65 的帖子) E8 ^! k2 u! ^/ {

添加CD3对纯度影响很大的，NK前期增值的太慢了。

作者: lihaifeng 时间: 2016-12-20 08:10

回复鑫鑫向荣的帖子
0 h. W0 M& z7 Z
具体的谁都不会说的，都是每个公司辛苦研发的，属于机密。还得靠自己看文献，不断的尝试。

作者: 何如 时间: 2016-12-20 13:58

NK细胞在体外培养会成集落生长,没有增殖可能是刺激不够,不一定就是细胞死了,建议台盼蓝染色计算一下活率.

作者: 鑫鑫向荣 时间: 2017-1-5 09:43

回复 Liyun65 的帖子& E! G V: ]' X% \* {) h: `, o- i- S
4 |0 o( t& V3 Q. K ~
OKT3应该和IL-2，IL-15不是一起加的，要隔一段时间加入

作者: moluxingke 时间: 2017-1-10 17:01

看回复有人说纯因子刺激方法不行，但如果用其他细胞做饲养层的话，临床应用岂不是有很大风险？

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)