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标题: 一个最基本的细胞解冻操作方法？ [打印本页]

作者: gxbzjznn 时间: 2016-11-23 17:00 标题: 一个最基本的细胞解冻操作方法？

大家解冻细胞的方法？如图所示，欢迎讨论，说一说两种方法的优缺点，你们更倾向于哪一种？

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作者: cxs 时间: 2016-11-23 21:47

这个两种经常交替着来，看心情，想到哪个用哪个吧，没什么刻意选择哪种。考虑的问题有以下几种* p: Y) m$ W3 K! P2 J
1、需不需要计数
2、细胞接种数量需不需要很精准（大量稀释的误差肯定比小量小）. O: x5 `$ k' h% p1 s
3、另外，接种量多少（比如你上面那个，12ml如果是在15ml离心管，你可以试试，用枪真不是很好吹匀，如果是在50ml，是否浪费了点）
4、在区别不大的情况下，哪个快用哪个( H; y+ l8 X: G- [3 J4 }, p+ ` F+ K' u' R
5、如果刚好像你上面那个情况，我习惯用6ml稀释，吹匀均分，每个孔再补加1ml培养基，原因无他，主要是懒，这样子可以不用调枪啊，哈哈哈

作者: gxbzjznn 时间: 2016-11-24 09:31

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* y" _# t1 T! @, h! ~2 x) J
你们不用电动枪？不用10ml甚至25ml的移液管？我个人觉得如果对细胞数要求不高，肯定上面那种好，而且我更倾向于预先在well里加一些medium。即便是对细胞数要求高，我也觉得需要这样做！

作者: cxs 时间: 2016-11-24 10:52

回复 gxbzjznn 的帖子& w+ b+ i+ p- [, Y( t- E! Y

电动枪，就这么点确实用不上，也用过一次性移液管，还用过巴氏管。不过目前我们是科研，不是针对临床，能用枪基本都用枪，省一点也方便一点。

作者: gxbzjznn 时间: 2016-11-24 15:58

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" B1 z9 ~$ D* z0 f! c
电动枪也可以插大量程的移液管（相当于枪头）啊

作者: cxs 时间: 2016-11-24 16:10

回复 gxbzjznn 的帖子4 M" e4 q D3 Y8 p. j- ?

我的意思是不至于为了重悬那么一点细胞去浪费一个移液管，就价格来说移液管>枪头吧，所以我选择枪，纯粹是从价格上来考虑，并不是说孰优孰劣。

作者: fm001982 时间: 2016-11-25 10:53

接种细胞少，建议先全部分散细胞再加入培养板。
一方面，建议多清洗一次，一方面，注意吹打均匀。

作者: sfnana 时间: 2016-11-26 09:07

2种都可以啊，个人习惯先在培养瓶或者6孔板中加入部分培养液，然后再加入重悬的细胞。然后十字型晃动培养瓶或者培养板，混合均匀。当然这个要看你是否需要计数，如果要计数，就在离心管混匀之后再加到瓶或者板子里。& j/ n0 C3 D2 P, |5 {

作者: gxbzjznn 时间: 2016-11-26 09:38

我觉得可以设计、做个小实验Test一下两种方法的优劣

作者: UlissesJR 时间: 2016-11-26 10:18

我服了

作者: xieyun20052005 时间: 2016-11-26 22:54

理论上都可以吧，只是更倾向于下面一种，感觉细胞一次混匀在培养夜里比较好，毕竟后家细胞体积较小，捎有不慎，影响较大

作者: miumiu 时间: 2016-11-28 16:44

我一般纠结的是要不要离心去除DMSO

作者: gxbzjznn 时间: 2016-11-28 20:25

回复 miumiu 的帖子8 a8 C9 o* @; Z6 H2 ~! {& z
`! W0 p/ J, Y( j& \; R$ S
再离心一次？

作者: gxbzjznn 时间: 2016-11-28 20:30

回复 miumiu 的帖子

这个个人觉得不用太纠结，毕竟残留的DMSO很少，而且加的Medium很多，建议第二天换液！

作者: niliu730323143 时间: 2016-12-1 08:48

抛开这两种方法的优劣，我觉得复苏后不应该立即种板做实验，而是应该在复苏后的下一代做实验，这个时候选择二是比较合适的，体积越大，误差越小。

作者: 晗晗 时间: 2016-12-1 09:03

我觉得第二种方法好些，这样细胞可以分散均匀，要是查数的话我觉得会浪费些细胞

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