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标题: 关于SD大鼠BMSCs，原代培养就发生了老化现象的原因？ [打印本页]

作者: 苏木素黎 时间: 2016-11-24 16:47 标题: 关于SD大鼠BMSCs，原代培养就发生了老化现象的原因？

关于SD大鼠BMSCs，原代培养就发生了老化现象，可能是哪些原因导致的呢？( v8 N; }: _- b ~/ a9 m; ~% Q
大家培养该细胞传代时所用的胰酶浓度是多少？0.25%的浓度是不是对细胞伤害有点大？
我是菜鸟一枚，恳请大家帮忙解答，谢谢！

作者: fm001982 时间: 2016-11-24 17:22

本帖最后由 fm001982 于 2016-11-24 17:22 编辑 4 m* f# y# D, i# ]* N; A

新手的话胰酶建议用0.125%的，边消化边观察，传代一般2到3分钟就可以了。
0.25%的浓度可以用，但时间要把握好，传代一般1分钟就消化得差不多了。, d! o! m8 N$ l
还要注意你的培养基，如果是买的话，注意酸碱度是否适宜，自己配的话注意渗透压。4 I7 B/ j* C! U3 N- I( m& q4 U
另外，接种的浓度也有一定影响。

作者: sports123 时间: 2016-11-24 17:22

这个浓度可以的，注意的是不要消化时间太长。

作者: 苏木素黎 时间: 2016-11-24 17:46

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3分钟可以吗？

作者: 苏木素黎 时间: 2016-11-24 17:47

回复 fm001982 的帖子0 [" E* o) f9 n' r/ v

谢谢，很有帮助

作者: sports123 时间: 2016-11-24 18:43

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3分钟时间有点长，一分种左右即可，具体情况视细胞密度而定。

作者: honey棉花 时间: 2016-11-25 16:45

这个浓度可以，胰酶使用前需要预热至37℃，消化前需要用DPBS洗一遍细胞去除血清等，这样消化的时候只要30秒-60秒就差不多了，一定要主要观察，消化过了损伤细胞，细胞也容易出现老化现象

作者: 苏木素黎 时间: 2016-11-25 17:27

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好的，谢谢，原代培养时细胞中含有许多杂细胞，如果消化一分钟，其中大部分好像都是杂细胞？

作者: hyyh03271016 时间: 2016-11-28 07:55

这个浓度的话，消化时间1-2min就可以了

作者: 晗晗 时间: 2016-11-28 09:09

这个浓度可以，但是不要消化的时间长了，消化太长时间细胞会有破损，或者可以浓度小一点，消化时间长一点

作者: 蓝林冰泽whac 时间: 2016-12-10 10:44

建议传代接种密度稍微高点儿，我养的细胞发现这样状态要好一些

作者: Albertchen 时间: 2016-12-12 10:50

额，原代就老化很严重？感觉要么杂细胞太多，要么培养基问题，P0-P1传代的时候，消化时间可以长一点，一般2-5min之内吧，P1之后消化时间尽量控制在1min左右吧

作者: 彭芳芳 时间: 2016-12-15 10:34

可能是你的胎牛血清不好，胎牛血清不好细胞就会容易老化

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