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标题: 求助！牙髓干细胞分离培养总是污染怎么办？ [打印本页]

作者: edwardellen 时间: 2017-1-12 17:07 标题: 求助！牙髓干细胞分离培养总是污染怎么办？

求助各位大神，做牙髓干细胞分离，总是污染，怎么办？
已经尝试了酒精、双抗、碘伏消毒灭菌，但还是总污染。( r* z% ^# B" r# ^4 ?6 u
每次都可以分出细胞来，细胞液贴壁了，但就是污染，简直都被折磨的没脾气了。" B4 A; W/ K' }0 P& y
牙齿来源都是医院消毒过后拔下来的，应该是很干净的，操作步骤也都很注意无菌。0 p! N: {5 Q, u! o
但就是会有污染，该用什么消毒清洗剂才能解决呢？; T7 T! u! P$ _

不胜感激！

作者: 免疫与细胞 时间: 2017-1-13 10:37

你要把怎么做的说出来才好分析，不过就现在来看，应该是环境原因，处理过程中动态环境你做过检测吗？

作者: 淘知路遥 时间: 2017-1-13 13:33

个人觉得的是样品本来就已经是污染的，牙齿本来就带有很多种微生物，消毒只是片面的，培养起来难度就更大了。

作者: woshibotao_01 时间: 2017-1-19 12:03

1.有可能采集时候就是污染的，只能多洗洗多消毒，龋齿或者结构不完整牙髓暴露的就别做了
2.操作过程中污染，很多实验室采用劈或者钻的方式，这些方式如果不规范很容易造成二次污染

作者: edwardellen 时间: 2017-2-20 14:50

回复 woshibotao_01 的帖子) U( h L/ ]; i
# O p- }. F# w# T3 \+ t. L+ N
一般你们用什么做杀菌消毒？

作者: 小云龙 时间: 2017-3-29 15:11

我们也做，好像不是那么复杂，第一看看所取牙齿有没有损坏，最好是品相好的，有的牙齿品相不好也别做，没啥意义。第二不知道你是怎么弄开牙齿的，我们是用挤压获得，然后用酶消化，还有牙齿拿过来没破坏之前做好用75%泡一下，培养的时候加双抗，皿用小皿

作者: wangddk 时间: 2017-3-30 10:34

想比较其他类型的细胞，的确牙髓更易污染。

作者: cellprobe 时间: 2017-4-6 12:22

拔掉的牙齿会泡在有双抗的生理盐水里面，然后用有双抗的生理盐水清洗牙齿至少三次。

作者: edwardellen 时间: 2017-4-6 13:35

看了大家的回答，并没有什么实际的用途啊，该注意的我都注意了。( ^4 [3 l& Q1 _+ H7 s
或许再深入的细节都算是大家做实验的诀窍，不方便公开吧。

作者: edwardellen 时间: 2017-4-6 13:36

回复小云龙的帖子
+ h; w/ g3 c! c) i- P4 I
用什么工具挤压呢？

作者: edwardellen 时间: 2017-4-6 13:37

回复 wangddk 的帖子* [+ Y4 h3 [- V( f/ K
2 t. g2 o& D; j' m# ]% l# N
可以说，目前做过的所有细胞分离，牙髓是最让人崩溃的，污染的风险太高了，很难保证每次都能稳定成功

作者: wangddk 时间: 2017-4-6 13:40

edwardellen 发表于 2017-4-6 13:37 ! s0 c0 U0 {6 w! D5 U$ M
回复 wangddk 的帖子
/ E% I# h8 Y; J/ b; \$ K8 M; h
可以说，目前做过的所有细胞分离，牙髓是最让人崩溃的，污染的风险太高了，很难保证每 ...

所以样本的选取也很关键

作者: tyzbtx 时间: 2017-4-27 13:58

最好操作前，酒精浸泡1min，然后用盐水清洗；你这是牙齿表面带过来的，消毒就可以了。

作者: liuyunmeng2002 时间: 2017-4-27 14:34

除了样本本身的原因，还需在运输过程中多多注意。

作者: 剡溪兰客 时间: 2017-4-28 14:20

培养加双抗就行，我养了好几份都没问题

作者: niliu730323143 时间: 2017-5-2 13:08

会不会是培养基或者消化过程中所用的试剂污染了，做个无菌测试呗。

作者: rzghc 时间: 2017-5-3 15:25

主要是选材、制备过程、培养过程3个方面

作者: laputa12 时间: 2017-5-4 15:38

消毒不彻底啊，操作不规范

作者: edwardellen 时间: 2017-5-5 08:40

回复 laputa12 的帖子
9 P/ G+ h8 k/ d0 R$ ]( I8 P# H
如何才能消毒彻底，操作规范呢？还请赐教

作者: 清水之殇 时间: 2017-5-8 10:18

拿过来的牙齿先别急着消毒，用少量生理盐水洗下，把生理盐水做下细菌培养，看看一开始染菌情况。
培养箱，一些东西彻底清洁消毒下，建议点个酒精灯。
不要想着医院的很干净，其实一般都会有点点染菌，消毒先用盐水洗，酒精消毒，然后盐水洗两遍，在双抗消毒，再盐水洗两遍。

作者: 抱朴子 时间: 2017-6-7 16:30

先找一颗无菌的牙（比如经过充分高压）作一对照实验，验证制备和培养过程有无问题。如果没有问题再考虑选牙的问题。

作者: 花饶然 时间: 2017-8-30 14:25

1.牙齿表面做好充分清洗，楼上大多数提到的双抗可以用到
2.牙髓挑出后，再用抗生素溶液作用，这个我就不细说，我们是自己组合的
3.消化完毕后，多离心洗涤几次，应该可以除掉很多菌% q1 L9 d8 y1 `( B/ I' | o
4.另外是污染的菌主要是什么，这样就考虑你培养过程中是否需要特殊添加何种抗生素

作者: 308443730 时间: 2017-9-21 19:09

一、采集的时候要做好充分的清洁消毒，牙齿取下来以后用酒精冲洗然后用生理盐水冲洗，防止表面的微生物进入牙髓内；( ^/ D7 K+ M! [- W o6 |3 p: k
二、运输的液体里面最好加抗生素，运输的时候加冰块，保证低温，防止细菌繁殖过快；
三、处理样本的时候再做一次消毒，最后就是保证处理过程使用的试剂物料都是无菌的，还有无菌操作。

作者: vicky406285822 时间: 2017-10-10 11:51

同意清水之殇的说法，先搞清楚污染出现在哪里，用灭菌过的棉签沾上PBS擦拭下牙齿做菌培养；在制备过程中，也可以再取样做一次菌培养，培养过程中再做一次菌培养！

作者: 15558156935 时间: 2021-5-8 16:12

好奇用什么工具挤压

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