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标题: 胃癌细胞培养心得及真菌感染相关问题 [打印本页]

作者: shuha 时间: 2009-6-19 16:13 标题: 胃癌细胞培养心得及真菌感染相关问题

本人养胃癌细胞sgc-7901已经半年多了，这半年来，可以说是及其不顺，同门的师哥师姐都说这个细胞很好养，增殖快，传代快，生命力旺盛，不容易感染，然，到我这里似乎就不像他们说的那样，问题接二连三的出现，但我从这一连串的失败中从一个懵懂无知者变成一个动作娴熟的能手，说句实在话还得感谢这批细胞给我带来的宝贵经验。/ g. H7 d( ~$ o6 Q" ~, K: M
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首先我要说一点：无菌操作

刚一接手细胞时，无菌相关事项早已耳熟能详，但我的第一批细胞在传第二代时不幸夭折，不明原因，总结一下还应该是操作的问题，被感染，虽没做细菌培养，但还应该是被感染致死。一师姐告诉说，她们从不穿隔离衣，戴手套，帽子，口罩，更有甚者还吸着烟进细胞室换液，细胞还是活的好好的，但现在看来根本不可取，无菌概念一定要强，才能保证不被污染。

第二点：营养充足。

复苏细胞后发现细胞状态不太好，本应该3天传代的但细胞就是不长，没办法，等，少则一周，多则半个月，好容易长满了，一传代，状态又不好，如此下去，几经周折。时间浪费，后来经验告知，在进行冻存，消化，传代等等操作前一天，一定要换液，让细胞吃的饱饱的才能经受你的折腾。' L# z- ?( L5 C
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最后我说一下真菌感染的问题。4 |% _0 G) [3 k! z
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在我们培养第三批细胞的时候，突然被真菌感染了，由于我们的培养室是在医院里，院内感染主要是葡萄球菌和真菌，由于实验室条件简陋，真菌得以传播，前一天看见培养瓶里多了些棉絮状的东西，还不以为然，第二天看后大吃一惊，满视野的树枝状的菌丝，生长及其旺盛，细胞完全被覆盖，心里那个难受，好容易养了9瓶状态不错的细胞，这下又完蛋了。没办法弃之。* L" ~' o4 K- q' U
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仅留下被感染较轻的一瓶，没办法细胞的源头没有了，师姐的货存被我们挖空了，于是死马当活马医，用氟康唑针剂每天3ml加完全培养基2梦ml对其换液，发现真菌居然飘起来了，吸出弃之，居然越来越少，3天后，一看不见一根菌丝，为以防万一，在培养基中加入定量氟康唑，注意调整ph值，ph稍偏碱最适，后来发现ph也是造成细胞不生长的又一原因。

总之，该注意的问题我们都注意的，就没问题，如操作出现的太不注意，出现问题分析起来就不容易

作者: carfan 时间: 2009-6-20 00:08

严重赞同楼主观点，国内绝大多数细胞培养间严重不合格，因为有抗生素没有污染，自己就根本不注重无菌操作，还鄙视那些严格认真的学生。个人认为，无菌操作是最关键的问题，合格的正压洁净间是基础设施，对于干细胞尤其重要，国外整个大楼是层流洁净空气，所以可以敞开操作，国内罕有如此好条件，关键在于自己注意。还有就是交叉污染，虽然你自己注意但是别人污染后，许多微生物可以通过空气传播，如支原体污染通常是整个培养间的其它细胞也非常危险，所以尽量自己的细胞完全自己一套东西。学生之间要尽量沟通协调，遵守细胞间的规章制度，尊重别人也是尊重自己，对于违章的学生一但无法劝说，应该及时汇报到管理老师，因为污染损失是巨大的让个人和老师都无法承受，所以大家都应该负责。

作者: douhw 时间: 2009-9-15 17:38

严格实验操作

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