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标题: 讨论，畸胎瘤制作方法 [打印本页]

作者: zpzp0312 时间: 2009-6-19 17:40 标题: 讨论，畸胎瘤制作方法

先前通过腹股沟皮下注射ES细胞获得畸胎瘤。
现在想寻求一些获得畸胎瘤的其他方法，希望大家群策群力踊跃发言。
最好把详细方法写出来！6 \+ s$ ^9 L/ r& p3 V+ z, v8 U
先来个“抛砖引玉”吧~~~
1：当ES细胞生长达70%汇集后，1比2传代，培养1天。
2：离散ES细胞前2小时，换新的培养基。" D: I6 {" ?! B7 @5 t0 W
3：离散ES细胞，计数。
4：1500rpm，5min+ G3 {+ _$ p% G( h4 i9 ^/ m
5：用300ul不含LIF的培养基重悬沉淀。5 |$ O2 X' B* y$ Y- [2 ~
6：双侧腹股沟管各注射150ul（大约100万细胞）细胞悬液。' K% \8 B% ?+ N; R. L& g( A5 ~
一般1个月后即可发现肿块形成。

作者: zpzp0312 时间: 2009-6-19 17:41

其他方法希望大家拿出来共享一下啊！

作者: herry 时间: 2009-6-20 10:46

好

作者: linxingxing 时间: 2009-6-20 16:44

不是要用裸鼠吗

作者: zpzp0312 时间: 2009-6-20 19:19

4# linxingxing
一般来说最好使用免疫缺陷鼠，因为成功率较高。0 R3 s0 ~: m8 w& C1 C
但如果ES细胞的品系和受体鼠品系同源性较高，同样会较容易地产生畸胎瘤。

作者: gggarfield 时间: 2009-6-23 00:37

YAAAAAA

作者: legool 时间: 2009-7-25 16:05

呵呵，正是我要做的，谢谢！

作者: legool 时间: 2009-8-4 22:55

楼主怎么跟你联系呢？

作者: yongfenglin 时间: 2009-9-21 14:04

请问这个畸胎瘤在普通小鼠和裸鼠上产生的比率有多少，有数据支持么？

作者: 可怜的孩子 时间: 2010-2-18 00:15

谢谢啦

作者: nhzxcsc 时间: 2010-3-5 14:45

我也差不多是这样的方法做的，但是一直没成功啊，烦！~

作者: 旺旺 时间: 2010-3-6 11:55

但如果是大动物的干细胞比如牛，那是不是只能用SCID鼠啊？SCID鼠多少钱一个啊？普通鼠效果会怎样？

作者: 冰罗布 时间: 2010-3-7 09:09

正在探索中

作者: zpzp0312 时间: 2010-3-8 12:27

大动物应该用免疫缺陷鼠吧，毕竟文献中都是这样说的
无论是大型哺乳动物还是人

作者: prettybear 时间: 2010-3-9 10:03

我是做肿瘤的。可以借鉴一下。
' ]. R2 z0 N# Q5 b! [
肿瘤还可以接种裸鼠腋下皮下，这个地方的皮肤很松弛。
后背的皮下也是不错的接种位置。

裸鼠为宜，毕竟文献中用得较多。国际通用方法，发文章时减少没必要的麻烦。

作者: myrudy 时间: 2010-9-27 22:23

mark

作者: liuer0041 时间: 2010-9-28 23:51

根本用不着这样麻烦，一瓶T25的ES细胞长到可以传代的水平（约10000000 cells），直接剧烈吹打下细胞克隆，离心收集，PBS洗一次，重悬于约100微升PBS中，皮下注射于裸鼠肩部皮下，一般3-4周即可形成1cm直径的瘤

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-9-29 10:54

大多数情况下都是皮下直接注射就可以了！

作者: shewawa 时间: 2010-9-29 23:22

天啊，我们的方法很残酷，在testis注射。有一老师说我们的实验太残忍，就为了要一个teratoma,他主张有in vitro differentiation就够了！腹股沟注射是不是会更简单啊？这样注射的话好像比较容易固定小动物吧。) e* b: x3 l# w
我的teratoma formation assay用50uPBS稀释，麻醉后注射。1个月后检查肿瘤。HE染色观察三胚层分化的组织。

作者: 天龙八部 时间: 2016-3-3 17:27

谢谢楼主。

作者: 天龙八部 时间: 2016-3-21 14:40

回复旺旺的帖子

普通小鼠不行吧，牛的干细胞对小鼠来说是异种来源细胞了，会被免疫细胞排斥掉吧？你最好用免疫缺陷鼠。

作者: Diane0321 时间: 2016-3-31 11:51

我们也是用的免疫缺陷鼠，方法和楼主的差不多。

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