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标题: 我养的NK细胞第六天的，健康人外周血，请教下，大多数细胞团贴壁很牢，吹打都不能完全 [打印本页]

作者: 快乐男孩 时间: 2017-2-19 12:31 标题: 我养的NK细胞第六天的，健康人外周血，请教下，大多数细胞团贴壁很牢，吹打都不能完全

本帖最后由细胞海洋于 2017-2-20 15:19 编辑

大家好，这是我养的NK细胞第六天的，健康人外周血，请教下，大多数细胞团贴壁很牢，吹打都不能完全吹下来，用细胞刮刀对细胞有损伤吗，NK细胞都是贴壁的吗，另外我的细胞为什么都是沿着培养瓶的四周贴壁。大家在看看状态怎么样。

作者: 细胞之家 时间: 2017-2-19 13:49

NK细胞属于半悬浮半贴壁的细胞，从你发的图片来看，第六天细胞长成这样，NK纯度还是不错的。贴壁细胞团块过大，说明操作不及时。操作之前，需要适度力量怕打培养瓶，使贴壁细胞脱落培养瓶，拍不掉的，再用移液管吹打。为什么会沿着培养瓶四周贴壁，是因为4周往往是移液管吹打不到地方，越长斑越大。

作者: 快乐男孩 时间: 2017-2-20 09:01

回复细胞之家的帖子$ [# T( t; v! I& a5 { R% B2 `/ e

谢谢老师的解答

作者: 快乐男孩 时间: 2017-2-20 09:04

回复细胞之家的帖子& |4 G, \) L, ~
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老师，是不是不要让他形成比较大的团块，我就隔了一天就张这样。我也知道比较大的团块容易引起细胞死亡，但是总吹打细胞是不是也不好啊

作者: optimus 时间: 2017-2-20 09:09

单个的贴壁细胞不是NK吧，团状的细胞是NK，状态也还不错，确实细胞团较大，我们养的一般都是小点的团状，是不是密度太大了？

作者: 细胞之家 时间: 2017-2-20 09:37

回复快乐男孩的帖子
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吹打对细胞肯定有损伤，但是高密度的生长，也对细胞不好，就要看哪个因素影响比较大了。' ?8 x# N: c9 X% v
如果细胞密度还可以，不想操作，最起码要拍一拍，使细胞分散点。7 F+ H6 E2 u0 X5 `1 ~
养NK，是一个细致活，基本上，前几天，是要每天观察的，根据细胞的实际情况操作。1 t3 I7 E" i2 U, q: k' p g

作者: 快乐男孩 时间: 2017-2-20 09:54

回复细胞之家的帖子

谢谢老师的解答

作者: 淘知路遥 时间: 2017-2-20 12:00

前几天细胞会自然贴壁，每天观察的时候要拍拍瓶子，大约6、7天开始细胞基本都是抱团悬浮的，像LZ第三张图片左半边部分的那些集落是不错的。

作者: 快乐男孩 时间: 2017-2-20 15:43

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谢谢您的解答

作者: wuhuaguo88l 时间: 2017-2-20 18:13

从图片看，细胞状态不错

作者: cyl黄金杖 时间: 2017-2-21 17:12

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NK细胞属于半悬浮半贴壁的细胞，从你发的图片来看，第六天细胞长成这样，NK纯度还是不错的。贴壁细胞团块过大，说明操作不及时。操作之前，需要适度力量怕打培养瓶，使贴壁细胞脱落培养瓶，拍不掉的，再用移液管吹打。为什么会沿着培养瓶四周贴壁，是因为4周往往是移液管吹打不到地方，越长斑越大，前几天细胞会自然贴壁，每天观察的时候要拍拍瓶子，大约6、7天开始细胞基本都是抱团悬浮的，像LZ第三张图片左半边部分的那些集落是不错的。

作者: 地球外世界 时间: 2017-2-23 10:59

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培养NK培养到第几天，成熟，表面CD3-CD16+CD56+多少算正常？培养到多少天终止培养？

作者: 地球外世界 时间: 2017-2-23 11:45

回复快乐男孩的帖子: O1 [0 h! a6 M0 O0 k" z8 ^/ }9 Q3 z

细胞状态感觉挺好的。团怎么会那么集中，而且大，厚？你是加凝集素之类的物质了吗？

作者: 淘知路遥 时间: 2017-2-23 13:34

回复地球外世界的帖子

回输最好时间是13-18天，没文件性要求规定表面标志物要达到多少算正常，各实验室培养的方法不一，一般可以达到30-60%吧，最好的有70-90%

作者: 淘知路遥 时间: 2017-2-23 13:40

回复地球外世界的帖子* Y0 k0 A& E1 J. M; c/ \; z2 h* V

没有加咧，我们的细胞培养到第4天一个镜下区域有几十个如你图3左半边那种团块，出现图3右边那样的情况个人感觉是没有把细胞拍散，导致细胞大量集中贴壁

作者: 快乐男孩 时间: 2017-2-24 13:08

回复地球外世界的帖子8 L, m8 d1 C! L' T
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nk可以养到21天，流式CD3-要达到60%以上。

作者: lihaifeng 时间: 2017-2-28 15:59

回复细胞之家的帖子
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请问NK细胞密度一般到多少需要调整，调整到多大密度？

作者: 细胞之家 时间: 2017-3-1 08:33

回复 lihaifeng 的帖子8 k% k: s! ]3 @/ R+ @3 _# p

一般密度控制在1-3E+06之间，不过不同的培养体系，增值情况不同，不同的外周血也不一样，要自己摸索。多做几批次，试试。

作者: shy-shen 时间: 2017-3-22 16:22

回复快乐男孩的帖子, M0 U4 m7 z, Z( l
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你添加了什么因子，我现在做NKT的研发，有些贴壁很牢固，有些几乎不怎么贴壁

作者: 金鹏 时间: 2017-3-24 11:32

细胞状态不错，前面几天观察的时候如果发现有聚集成较大团块的趋势建议进行轻轻拍打、摇晃，使细胞分散均匀，在后续的培养过程中也不建议细胞聚团过大。细胞贴壁比较劳的话强行吹打肯定会有较大损伤，轻轻吹打，吹打不下来的细胞建议不要，目测LZ细胞的状态可以进行后续培养的细胞进行扩增之后完全能够满足后续的实验需要！细胞沿着瓶四壁聚集，这种情况我以前也见过，在培养瓶放入孵箱时，你平着轻轻摇晃瓶子使细胞分布均匀。

作者: liuyunmeng2002 时间: 2017-3-24 13:21

都在四周说明一开始就在四周，铺瓶时没有让细胞均匀分布，在铺瓶操作后，可使培养瓶平放。

作者: 免疫与细胞 时间: 2017-3-27 15:13

本帖最后由免疫与细胞于 2017-3-27 15:15 编辑

不要刮了，拍打瓶子或吹打都可以，建议转到新的瓶子里培养，每隔2天就观察，拍打混匀一次。0 ]+ C5 q6 o t2 c3 A: o% m8 c

你这细胞培养的应用很充足啊，这是打过动员剂的还是受伤人体来的，那些贴壁的形态有异，开始有MSC样的形态。

作者: shy-shen 时间: 2017-3-28 08:59

您好，我想问下你是用什么因子刺激的

作者: ch15594152551 时间: 2017-4-6 11:07

有没有NK细胞操作流程 }8 Z) P) E/ d

作者: yangzeqian 时间: 2017-4-6 13:08

NK细胞会有部分贴壁，并且抱团会越来越大，每次补液传代的时候轻柔混匀，如果用的是T175瓶，轻拍瓶侧可以使贴壁细胞脱落；用袋子的话轻柔袋子的D区，悬浮培养。
贴壁过牢解决方法：可以拍动（自己把握力度）瓶侧使细胞脱落，基本不会贴的用到细胞刀的程度。细胞状态很不错，NK的生长速度很快，注意及时传代补液。

作者: romanyuo 时间: 2018-2-6 14:17

是不有NKT细胞贴壁？建议可以做个流式细胞仪，CD56+CD3+就是NKT了

作者: 曦馨橙子 时间: 2018-2-6 22:23

前期贴壁细胞是筛选出去往DC方向的细胞，NK细胞是悬浮的，NK细胞浓度不要太高了~~用培养袋养效果会更好，也更安全~

作者: 鑫鑫向荣 时间: 2018-2-27 09:49

成团的话，应该是后期会散开的。你这个团有点大。个人觉得可能密度太大，换成培养袋试试。吹不下来的可能还不是NK细胞，继续诱导有可能会变成NK。细胞刮刀是可以用的我们经常用的，但我们的贴壁没有你这么多

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