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标题: NK细胞培养过程中，用血清代替血浆有关系吗？ [打印本页]

作者: 爱学习的青年 时间: 2017-3-27 14:14 标题: NK细胞培养过程中，用血清代替血浆有关系吗？

我们做的NK细胞培养，所用的原细胞为2-4天之前所提取的单核细胞，无血浆，因此用血清按血浆灭活步骤进行处理，用血清代替血浆。3-4天乃至1周后后显微镜下整个视野里细胞数目极少，几乎为个位数，这些是什么原因呢？

作者: 免疫与细胞 时间: 2017-3-27 15:07

你说的逻辑有点混乱啊。你的血清是从哪里来的？动物的？如果是动物的，就按照使用说明书使用就可以啊，没有问题，可以替换。; \# H" s; e2 S
没有培养出来细胞可能你的血清有问题，也有可能操作不对。

作者: 爱学习的青年 时间: 2017-3-27 15:15

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补充一下。血清是买来的;单核细胞是抽的其中一个人血液提取的;由于当时没有工具，所以就没有再次抽血分离血浆

作者: 爱学习的青年 时间: 2017-3-27 15:15

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血清放56度灭活，看到一点点絮状物，最后看到的细胞特别少

作者: 免疫与细胞 时间: 2017-3-27 15:19

本帖最后由免疫与细胞于 2017-3-27 15:20 编辑
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不用再抽血分离血浆啊，直接用提取单个细胞的血提血浆，先离心分离血浆，在用DPBS稀释血液，加到淋巴细胞分离液中分离单个核细胞

作者: 免疫与细胞 时间: 2017-3-27 15:20

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血清处理的没问题，估计血清本身有问题。

作者: gondobar 时间: 2017-3-27 15:29

我们做的NK细胞培养，所用的原细胞为2-4天之前所提取的单核细胞？这句没懂，2-4天前的细胞还养？

作者: 爱学习的青年 时间: 2017-3-27 15:33

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比如在“今天”做单核细胞的提取，然后直接冻存了，3天后复苏这批细胞今天NK培养。没说清楚

作者: 爱学习的青年 时间: 2017-3-27 15:36

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那天老师给我们一个新方法提取单核细胞与常规方法提取单核细胞，最后对比两种方法提取的单核细胞纯度，最后血浆上清让我们扔掉了，后面没想到要用这批细胞培养NK

作者: 浅浅的花花 时间: 2017-3-27 15:38

是动物血清吗？一般动物血清是否要灭活要根据购买的血清说明书，很多是不需要灭活的。建议还是用自体血浆，分离获得PBMC之前，先高速离心获得自体血浆，将自体血浆56℃灭活30min，高速离心去掉凝集的纤维蛋白原等絮状沉淀，即可添加到NK细胞培养基中，增殖效果明显！

作者: 免疫与细胞 时间: 2017-3-27 15:41

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看了你的回复，我感觉最大的问题是你提取完PBMC，直接就冻存了。你怎么保证冻存后细胞活性，又是怎么操作的。问题最大是在这里

作者: 爱学习的青年 时间: 2017-3-27 16:10

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就是因为有好几个地方感觉不如意的，所以想请教一下，不然无法排除，如果血清可以替代血浆，那应该就是冻存单核细胞的问题，感谢大家

作者: shy-shen 时间: 2017-3-28 08:59

这有可能就是血清的问题，有的血清确实挺差的，培养肿瘤细胞还可以，对免疫细胞作用不大。

作者: 地球外世界 时间: 2017-3-28 09:48

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血浆主要提供哪些营养物质？

作者: gondobar 时间: 2017-3-28 13:45

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NK细胞比例很低，冻存后扩增比较困难，但并不是养不起来。方法和血清没问题的前提下，前期可以加高血清比例。

作者: cellprobe 时间: 2017-3-28 13:51

不管是动物的还是自体的，血清都要灭活的。如果用于临床，不能用动物血清。其实制备NK，可以完全不用血清，光加细胞因子就足够了。你应该你从其他方面改进工艺，比如NK细胞培养密度，细胞因子的浓度和种类是最关键的，一般开始还要CD16单抗包被培养瓶。

作者: 阿秀哥 时间: 2017-3-28 14:08

楼主分离单个核细胞的时候不是有血浆的吗？难道都没灭活保存下来？

作者: 金鹏 时间: 2017-3-28 22:39

在科研中NK细胞培养用血清代替血浆是可以的，有的时候考虑到分离的血浆很少，不足以支持整个试验的用量。大部分市面上采购血清不需要进行灭活处理，如果自己需要灭活处理，建议56℃，60min，灭火后高速离心去除沉淀物。你提到的“数目极少”，不知道仅存的细胞状态如何，是否有细胞碎片？还有你的NK培养体系大概是怎么的？这些都不太清楚，如果要说原因，笼统的说会有很多可能影响的因素，譬如你这个培养体系中的因子，配制的培养液中缺少某种因子也可能导致整个培养的失败，并且光靠后期观察和检测也找不到实际的原因。建议下次做的时候设2组及以上的平行...

作者: liuyunmeng2002 时间: 2017-4-17 10:41

复苏再培养的细胞，本身细胞数量就会低，而且还要看复苏技术掌握情况，还要看你的培养体系，跟是血清还是血浆关系不大

作者: 孤独山石 时间: 2017-4-21 10:53

2-4天之前所提取的单核细胞,你是冻存还是怎么的，NK细胞在PBMC中本来比例就少，PBMC冻存再复苏后个人认为没有多少存活的了吧。

作者: yangzeqian 时间: 2019-11-13 14:21

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请问CD16的具体使用量是多少？

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