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标题: 基因定量实验（qPCR，realtime PCR）问题咨询？ [打印本页]

作者: gxbzjznn 时间: 2017-4-6 09:21 标题: 基因定量实验（qPCR，realtime PCR）问题咨询？

谁做过基因定量实验（qPCR，realtime PCR）帮我分析一个结果！图1、2为不加模板（cDNA，此处作为negative control ）只加水的扩增曲线和熔解曲线，图3、4是正常实验组加模板（cDNA）的扩增曲线和熔解曲线！我的问题是：为什么只加水的阴性对照组也会出现扩增曲线和熔解曲线？这是正常的吗？如果是，为什么？如果不是，可能会是什么原因造成这样的结果？希望，做过的前辈帮忙指点一下！

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作者: cellprobe 时间: 2017-4-6 12:17

你先比较一下Ct值，实验组的Ct值应该比对照组的小。做real-time，最好有阴性对照（加水）和阳性对照，实验组的Ct值应该在阴性对照组和阳性对照组之间。

作者: gxbzjznn 时间: 2017-4-6 12:51

回复 cellprobe 的帖子5 V9 h8 T+ X8 \3 f- p/ F
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阳性对照是什么？

作者: sports123 时间: 2017-4-6 16:58

你比较一下，第一个图和第3个图，第1张图是在35-40个循环之间起跳，第3张图是在30-35个循环之间起跳。先说你的目的基因，可能表达量比较低。你阴性对照出现这种结果也可能你操作过程中存在一定的污染。

作者: lybai 时间: 2017-4-7 10:05

你的阴性对照溶解曲线峰有可能是引物二聚体，你可以做个普通PCR，跑个电泳看看，一般引物二聚体大小小于100bp,或者你用软件检查一下你设计的引物，是否容易形成引物二聚体。第四章图的熔解曲线，第一个峰，应该是你的特异扩增产物峰。

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