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标题: 请问造血集落培养的相关问题 [打印本页]

作者: ye1018 时间: 2009-7-13 13:56 标题: 请问造血集落培养的相关问题

求助：造血集落培养时应注意什么，琼脂和甲纤那个好些，我做染色怎么做

作者: 玉米卡 时间: 2009-7-13 14:12

培养液PH.7.0-7.2为好) \ j. d3 [ `% m
血清.马血清.牛血清.人血清.培养造血祖细胞以健康马血清为好.切忌使用蛋白沉淀物质的血清
刺激因子要严格遵守各类刺激因子的制作程序' A& ~6 T1 Z9 y* c* I5 Q$ N
支持物.包括琼脂和甲纤及血浆凝块等.要注意浓度的控制和加入支持物时的操作手法.
温度湿度及CO2要恒定.
最好做预实验.检测培养液.刺激因子.琼脂及器皿等是否合格.

作者: 玉米卡 时间: 2009-7-13 14:12

一般培养CFU-GM采用琼脂半固体培养方法" F1 o1 [! Z: X1 t, Q& o7 d
培养CFU-E/BFU-E/CUF-Meg/CFU-Mix采用甲纤培养体系!6 y7 u! z9 X" p( P
具体要求实在内容太多!要写一本书了!
染色方法也是一样!: g2 S7 [ b, P! v% L, E. q, U
具体看你要作什么!你的问题太笼统!不好回答!
祝你好运!

作者: wuweitmc 时间: 2009-7-13 14:13

一看就知道是新手，我来说说，我做了一年的集落培养。' x& o# |' l5 B
造血集落的培养也叫半固体培养，常见的有甲纤、琼脂和血凝块培养。各有所长，甲纤培养可以一劳永逸，使用时拿来就能用很方便；而琼脂就不那么方便了，现用现溶，并且操作时要眼疾手快，否则前功尽弃；你如果做琼脂培养我再给你详细说说，到时联系我。并且做HPP-CFC时，用琼脂培养容易些，虽然文献报道可用甲纤培养，但我没能培养出。
培养时注意的问题很多，我在前些时候也说过，在重复一下，归纳起来有如下几点：1.做甲纤培养，混匀时动作轻柔，避免起泡，起泡后影响集落形成；另外甲纤一定最后加入。
2.种完体系后，别忘了，在孔周围加点无菌蒸馏水，防止培养过程体系水分丢失，水分丢失体系易干影响集落形成，因为培养集落时间一般在7天左右，甚至21天，mCFU-GM 7d,hCFU-GM 14d,CFU-E 3d ,BFU-E 14d CFU-GEMM 14d ,HPP-CFC 21d.0 C9 F- w, S* D P
3.培养HPP-CFC要用琼脂来做。我用甲纤做过，不长HPP-CFC，反而长CFU-GEMM，同样体系用琼脂做，可获得HPP-CFC，做BFU-E,CFU-E时，甲纤做的很好，集落很漂亮。琼脂做集落关键掌握手法，琼脂不能太热，太热细胞易被烫死，太凉不凝，加时边加边摇匀。
4.血清的选择也很重要，有的血清适合做红系，有的适合做粒系，所以首先要知道你要做什么集落，选择适合的血清。 . _- ]8 |9 f/ U( z, t
染色，你说的太笼统了，集落染色有很多种，例如：吉姆萨，瑞士－吉姆萨，联苯胺染色。最近我做了瑞士－吉姆萨染色，原位的话，首先挑出集落于波片上，然后用醋酸纤维薄膜压片，然后甲醇固定，再染色，染色5分钟，可以立即观察，也可封片以后再看。

作者: lyj-0017 时间: 2009-8-1 12:48

4# wuweitmc 0 c. O& y* }& u" b. j
W& d' f) }8 H. K6 x

这位大哥怎么联系，我现在就是要做集落的培养，想多向你请教一下如何操作，能否留个联系方式那？

作者: C_H_Yuen 时间: 2010-11-4 23:21

回复 4# wuweitmc
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有没有造血干细胞的镜下图片？？

作者: 农夫有点田 时间: 2011-1-14 14:49

回复 wuweitmc 的帖子

您好厉害得多多向您学习

作者: verakiww 时间: 2011-5-9 23:52

回复 wuweitmc 的帖子, J t9 L" J8 H+ S

你好我看了你的造血干细胞集落培养的回复很想加你qq向你请教可以吗万分感谢！我的qq357894999 希望你可以方便加我谢谢啦

作者: 细胞海洋 时间: 2011-5-10 00:41

回复 verakiww 的帖子. n& U3 r5 q/ j |+ Q) S \# ]' Q

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