干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 成体NSCs原代消化酶的问题 [打印本页]

作者: cloud100 时间: 2017-5-12 17:25 标题: 成体NSCs原代消化酶的问题

本帖最后由 cloud100 于 2017-5-12 17:25 编辑 ( A8 h' i) K( d3 [6 s- I

/ T7 k8 {6 d4 o9 X. N1 _, `2 P' d2 ]$ O
我现在养成体NSCs，如图所示，取3月龄大鼠的SVZ和DG取脑组织（可能范围略宽一点），剪碎成约1mm3大小组织块，8 p' P( r5 B3 L8 r9 b2 @( f; X
用3ml Hank’s液+2.5mg/ml胰酶（gibico）+15mg/ml 木瓜酶（solabio）+2.5mg/ml 2型胶原酶（merk）+0.2mg/ml Dnase（solabio）+0.02%EDTA，
37℃消化 30min，发现组织块消化效果很差，基本上看不出组织块有减少的迹象，经过吹打后，依然有大量组织块，消化得到的细胞也很少。) @/ d) J: w1 j! x- r8 V
" \ a2 f* n2 m1 O+ T: i
我这个酶浓度是反复试验、不断加量到这个剂量的，已经比文献超出了许多倍，但每次都无法取得良好的消化效果。
以前养神经元，取新生鼠皮层，1.25mg/ml的胰酶，15分钟，组织块很快就彻底消化干净了，怎么成年鼠的脑组织这么难消化？2 n' m: ]! b3 o4 D
" Y' L, g% T, H M! F6 P
请教各位老师，有没有养成体NSCs的经验可以指教的？谢谢。

[attach]86191[/attach]

作者: cloud100 时间: 2017-5-13 08:03

消化酶都是现配现用，质量应该不存在问题，胰酶每次拿来传代效果都很好。。胶原酶和木瓜酶都是新买的。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)