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标题: 大家用血清终止胰酶消化应该用多少？ [打印本页]

作者: zuishui 时间: 2017-5-24 11:31 标题: 大家用血清终止胰酶消化应该用多少？

我这有0.25%的胰酶，4ml左右应该用多少血清终止？胎牛和小牛血清有区别么？

作者: yanxm920 时间: 2017-5-24 11:39

需要先配制终止液，一般是10%血清的培养基即可；再进行终止消化，一般是胰酶与培养基1:1终止，但建议你培养基稍微多一些，效果更好！

作者: zuishui 时间: 2017-5-24 12:50

yanxm920 发表于 2017-5-24 11:39 . n% u) L0 T' q) V8 a% K
需要先配制终止液，一般是10%血清的培养基即可；再进行终止消化，一般是胰酶与培养基1:1终止，但建议你培养 ...

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谢谢，血清用区别胎牛和小牛么？另外，这终止液是要洗掉的吧，那我不用培养基而用PBS或盐水稀释血清是不是就不可以?

作者: uslzhang 时间: 2017-5-24 14:38

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您的问题提的有点笼统，不同来源的细胞所需要的消化液不同，终止消化的牛血清液有区别。至于终止液要不要洗掉要看你的细胞随后要做什么，牛血清残留是否干扰，PBS或盐水均可用于洗涤细胞，只要不影响细胞活性。

作者: zuishui 时间: 2017-5-24 15:17

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脐带间充质干细胞，传代培养

作者: baby00000003 时间: 2017-5-24 16:05

建议你换成trypLE，比传统的trypsin粉剂不知方便多少倍～

作者: garyxu 时间: 2017-5-24 16:34

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直接用盐水按盐水：消化液2:1的量终止消化，不过也要看你胰酶的浓度。

作者: niliu730323143 时间: 2017-5-24 18:03

10%血清的培养基，胰酶与培养基1:3。

作者: 木木木木 时间: 2017-5-25 08:34

我用的是完全分装好的.0.05%EDTA混合液

作者: uslzhang 时间: 2017-5-25 08:56

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用完全培养基1:1

作者: yanxm920 时间: 2017-5-25 09:02

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你是养脐带间充质干细胞，如果是临床研究的，是不能加胎牛血清和小牛血清的，需要添加血清替代物！

作者: zuishui 时间: 2017-5-25 09:05

garyxu 发表于 2017-5-24 16:34 . y/ @+ g) P, H& E [& C" `4 H
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直接用盐水按盐水：消化液2:1的量终止消化，不过也要看你胰酶的浓度。

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盐水可以终止消化么？

作者: zuishui 时间: 2017-5-25 09:06

木木木木发表于 2017-5-25 08:34
7 k7 T% S y: w2 K我用的是完全分装好的.0.05%EDTA混合液

我这只有现成的0.25胰酶带EDTA的，不知道应该用什么稀释成0.05的

作者: 木木木木 时间: 2017-5-25 09:34

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我这里也有这种，是康宁的100ML瓶，我用PBS稀释，现在来看效果还不错

作者: zuishui 时间: 2017-5-25 10:06

回复木木木木的帖子5 i1 N3 f% A4 f' H# f* l

那你用什么终止的？血清还是专门的胰酶终止液？

作者: 木木木木 时间: 2017-5-25 10:11

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血清

作者: cuijiaoyan 时间: 2017-5-26 11:48

我们终止消化用5%血清就行，个人认为用培养基还是PBS还是生理盐水配终止液关系不大，主要目的是为了稀释消化液，终止液与消化液1:1，可以多加一点点，胎牛血清和小牛血清当然有区别。

作者: 剡溪兰客 时间: 2017-5-26 17:02

这个浪费，用该样本使用过的培养基就可以了，或者直接用盐水稀释，让他的消化能力降低即可

作者: 2357710447 时间: 2017-5-31 10:56

很简单根本不需要浪费培养基姨酶稀释一倍变成0.125% 对细胞损伤小终止液就是生理盐水培养基那么贵别浪费现在大部分生产都是这样成本成本成本！希望对你有用

作者: yangyaping 时间: 2017-6-12 10:18

用配好的完全培养基就行，比例1:1或者1:2都行

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