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标题: I型胶原酶消化脂肪，提取间充质干细胞过程中，这些间充质干细胞是不是处于饥饿状态呢 [打印本页]

作者: sports123 时间: 2017-6-8 16:18 标题: I型胶原酶消化脂肪，提取间充质干细胞过程中，这些间充质干细胞是不是处于饥饿状态呢

I型胶原酶消化脂肪，提取间充质干细胞过程中，用PBS配置的胶原酶消化30-60min过程中，这些脂肪中的间充质干细胞是不是处于饥饿状态呢，会不会对细胞以后的状态有一定的影响呢？求大神指点。

作者: 爱学习的青年 时间: 2017-6-8 16:24

为什么会觉得细胞处于饥饿状态

作者: sports123 时间: 2017-6-8 16:30

回复爱学习的青年的帖子9 f7 D1 R! u; Q' ?
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在消化的过程中(30-60min),细胞没有接触到任何营养物质，细胞会不会处于饥饿状态呢？

作者: rzghc 时间: 2017-6-8 16:40

本帖最后由 rzghc 于 2017-6-8 16:41 编辑

本身新鲜的脂肪组织中就有各种结缔组织、血管、祖细胞提供营养的，消化过程中主要还是胶原酶对细胞的影响大一些，想要消化过程中活率高一些可以使用dmem配置胶原酶，或者可以低温过夜消化组织，不过pbs配置的胶原酶消化完后细胞活率稍低杂质稍多但并不影响后期培养。

作者: sports123 时间: 2017-6-8 16:48

回复 rzghc 的帖子 u9 m4 @+ Z! M
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请问，用DMEM配置胶原酶还需要加血清吗？

作者: rzghc 时间: 2017-6-8 17:07

回复 sports123 的帖子! L) t. N1 I) l5 O4 Q
5 {6 }1 V2 p3 q& h) y' K6 u1 I9 n
加血清就终止消化了，不要加

作者: sports123 时间: 2017-6-8 19:47

回复 rzghc 的帖子/ }) J5 Q( q. p5 T- E: L% a
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血清可以终止胰酶，但对I型胶原酶是没有终止作用的

作者: rzghc 时间: 2017-6-9 08:25

回复 sports123 的帖子6 s$ L7 G# U2 `, P5 h

这个倒是没做过实验，以前看文献是有加血清终止，配置不用加的

作者: Amy1114 时间: 2017-8-31 15:44

我们用的胶原酶是用汉克斯液配制的（Gibco的说明书上就是这么写的）。因为汉克斯液里含有葡萄糖，对细胞有营养作用，所以还好。) a8 i0 J4 @4 ` h$ _9 R. {
另外脂肪组织取到过后应在4h内处理完毕，得率较高。4°C保存。
再有就是，离心的时候建议用低温离心机，4°C离心。$ _) n( U3 J4 H5 _1 F
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但是胶原酶消化的时候温度一定是37°C哈

作者: sports123 时间: 2017-9-1 09:46

回复 Amy1114 的帖子

恩恩，谢谢，我们现在用DMEM配，用起来也不错

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