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标题: 关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题 [打印本页]

作者: gsg040222 时间: 2017-6-15 09:28 标题: 关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

如何才能更好的加液，分层更好，还有就是离心完后如何才能更好的吸取白层？

作者: wzs1985 时间: 2017-6-15 09:48

你可以试一试：. k0 U& b; {* _
1，先离心血液，去除血清后。在用生理盐水稀释。
2，然后按照离心液2：血液1的比例离心。

另外，可以试一试stemcell的分离管，中间有隔层。

作者: 杏色玻璃 时间: 2017-6-15 09:59

1、血液和生理盐水（不含钙镁离子的PBS）1:1稀释* K& } o) [" I5 K5 v
2、将分离液和稀释后的血清1:1混合。将稀释的血液缓缓的加到分离液上方；( [: O( e* X# F" s" v6 N$ Z* v
3、离心 w( q0 H8 R% z0 i) w' L, l( Z

作者: Mrhydra52613 时间: 2017-6-15 11:31

1.先加淋巴细胞分离液，然后尽量倾斜离心管，移液管贴着管壁紧靠分离液表面，双手手臂最好放在操作台上，以免摇晃。缓慢加入稀释过的血液，期间可以左右晃动增加接触面减少冲击，轻拿轻放 ; u/ z6 F- X: r$ ]! a! K
2.离心机升降速调节到最慢% {/ H& p, k6 I$ v: U0 G
3.稀释比例前面已经有人说过了
4.离心后用移液管弃掉一部分上清，至白膜五六毫升开始吸取，缓慢但是不要停

作者: 阿秀哥 时间: 2017-6-15 11:34

wzs1985 发表于 2017-6-15 09:48 ' B$ K3 W3 ~/ U
你可以试一试：
3 a& v0 y0 `! }6 X! |0 l d1，先离心血液，去除血清后。在用生理盐水稀释。9 E z3 B+ D5 j8 {. A3 G
2，然后按照离心液2：血液1的比例离心。 ...

8 f- x2 v4 I. S* R6 f7 @7 _0 u
分离液与血液的比例是1：2吧

作者: gsg040222 时间: 2017-6-15 12:40

回复 wzs1985 的帖子
. J. Z9 O" M% e" n3 m
谢谢

作者: gsg040222 时间: 2017-6-15 12:40

回复杏色玻璃的帖子8 h7 G/ w" X8 t! t

谢谢

作者: gsg040222 时间: 2017-6-15 12:40

回复 Mrhydra52613 的帖子, h3 U) I" ^$ e; w
7 ?+ V5 s* P3 K9 {) y
谢谢，我进实验室试试

作者: 王宏伟8901 时间: 2017-6-15 13:22

去掉血清后，拿生理盐水稀释，再加分离液。

作者: 淘知路遥 时间: 2017-6-15 14:32

先加分离液（与稀释血液1:2），离心管倾斜，血液缓慢从管壁加入，避免将分离液层冲破，加了几毫升血液，然后可以将离心管立起来继续加血液

作者: wzs1985 时间: 2017-6-15 16:03

回复阿秀哥的帖子6 @  f  m5 M7 R8 o
  ~. w& E; A/ z3 \+ x6 P8 z
对的，  抱歉弄错了。
或者1比1也行。

作者: Mrhydra52613 时间: 2017-6-22 07:56

回复 gsg040222 的帖子' D% n/ `; k& T1 W

效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

作者: long3390hai 时间: 2017-6-26 16:25

回复 gsg040222 的帖子. D0 |# L ]: }' {
0 S5 a# ^2 E7 d" k4 V) }
1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。
2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。5 r; k6 h4 {/ d5 {' d4 B( x0 h3 |( e: {6 L
3、离心转速慢升慢降。
4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

作者: gsg040222 时间: 2017-6-28 09:01

回复 long3390hai 的帖子

谢谢

作者: gsg040222 时间: 2017-6-28 09:02

回复 Mrhydra52613 的帖子
: _, Q2 z% S' S0 p# L0 v
效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

作者: gsg040222 时间: 2017-6-28 09:04

回复 Mrhydra52613 的帖子9 }9 r' o+ Y) d) ]9 N( B( v& s
5 J+ a2 N- a4 f1 q: A9 I
恩恩，就是要这个，非常感谢您

作者: jxsese 时间: 2017-7-4 14:03

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

作者: wjh四月 时间: 2017-7-4 14:52

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

作者: gubingxia 时间: 2017-9-14 10:25

1盐水充分稀释（比例大于1:1）0 Q/ P- ?7 g' A. t% j
2重悬混匀（不能有团块）
3血液与分离液比例1:1
4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降
5离心升10降19,600G7 i, |& a$ e* x- j
6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。
7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体3 D& s% w7 o; n. v* @
8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min
9培养5 Z+ Z8 J# s! T; J8 r) D+ U5 s" w
我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光的离心机

作者: 曦馨橙子 时间: 2017-9-15 15:56

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~

作者: edwardellen 时间: 2018-2-23 14:18

买专用的分离管，现在进口国产的都有，省时省力

作者: jiuxuya 时间: 2018-3-6 14:13

回复 edwardellen 的帖子5 K$ r/ e8 |& h# G1 @; i
. m! G6 r; m4 q9 y' g% Z- Q% m
请问有网址吗？想去看看淘宝搜不到。。。

作者: 筱筠 时间: 2018-4-24 11:47

离心后弃掉血浆层，用和红细胞等量的D-PBS混匀红细胞。缓慢的加入淋巴分离液中，注意淋巴分离液使用温度20加减2摄氏度。离心时离心机条件慢加慢减。吸取白膜层时，移液管在白膜层液面上，慢速环绕吸取。

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