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标题: 请问实验室用于做细胞爬片的盖玻片如何进行消毒处理？ [打印本页]

作者: lizhen 时间: 2009-7-22 10:10 标题: 请问实验室用于做细胞爬片的盖玻片如何进行消毒处理？

我的实验是培养骨髓基质干细胞（MSC),传代第三代在6孔培养板培养，我想请问一下做细胞爬片的盖玻片如何消毒处理，每个孔可以放几块，我想节省试剂和培养基，谢谢

作者: smlyk 时间: 2009-7-22 10:51

1、取干净的盖玻片若干，用洗衣粉轻轻擦洗（注意轻柔，不要留下明显痕迹，方便以后观察细胞）$ i. c, E0 ]( b1 ]8 Y( d6 I+ j, `- l
2、5％的稀盐酸泡过夜！
3、取出盖玻片后，烘干后，泡酸，过夜！
4、用自来水反复冲洗！9 L! s1 p4 `5 X/ H) o8 u
5、（我个人认为这一步很重要）将玻片放在水中；先准备一干净饭盒，往里面铺几层纱布；用镊子轻轻将玻片夹至纱布上，每块玻片之间不接触。若干片后再铺纱布，接着再放玻片！
6、高温高压消毒！# P6 ]9 i3 L3 R+ w5 D. Q' {
以上是细胞爬片之前玻片的处理，爬片之前用0.1％明胶涂玻片，干后在铺板效果也很好！
一点建议！

作者: wojoo 时间: 2009-7-22 15:24

我的经验是
1、取干净的盖玻片若干，用洗衣粉轻轻擦洗（注意轻柔，不要留下明显痕迹，方便以后观察细胞）; G0 z0 e2 y* A1 A3 O' Z
2、硫酸重铬酸钾过夜! c; r$ o, I! t% }
3、取出盖玻片后，用自来水反复冲洗30分钟。
4、用双蒸水漂洗10分钟。& W' _6 K( \& S2 ^- a) a7 X
5、取出后直接放入100%酒精中（如果没有也可以置入95％的酒精中）过夜后，用镊子夹取出，自然晾干即可用。也可以置于酒精中长期保存，用时取出。
本人认为骨髓基质干细胞贴壁能力较强，可以不用明胶包被；由于酒精有消毒作用可以不用高压或者高温。

作者: sailboat 时间: 2009-7-28 17:50

一般可用酒精泡，之后紫外灯照射
但是还会有水印，这个问题不好解决 A9 c s4 T9 C* I+ ^8 g
若是六孔板，每空可放5～6个爬片

作者: 王乾 时间: 2011-4-22 18:21

把爬片小心放入板空里面，用PBS洗个几遍，再照一到两个小时紫外就可以，当然有人推荐先用PBS洗，在高温灭菌，我的经验是再怎么洗一凉干总会有水渍，其次照一下紫外就可以达到灭菌的目的，我从来都没污染过。照完紫外，加上明胶或者多聚赖氨酸室温一到两小时，吸掉，PBS洗几遍，然后就可以传细胞了，由于是做细胞亚定位，所以细胞尽量传稀点，这样就可以保证一个视野下尽量有较少的不理想的细胞干扰，一般情况下24孔板的一个孔我铺3万左右的Hela细胞，效果很不错。

作者: conggu 时间: 2011-4-22 18:30

本帖最后由 conggu 于 2011-4-22 18:31 编辑

我一般是把拨片跑在无水乙醇中，使用前用酒精灯灼烧，然后放入六孔板中。。。一定要用无水乙醇，用镊子夹，这样才不会有水印。

作者: luoziwei 时间: 2011-4-22 23:06

我都是75%酒精浸泡保存，使用的时候拿出来放在PBS浸泡照紫外过夜，然后多聚赖氨酸处理，风干后加PBS洗，然后置于孔内用培养基润洗一遍，最后吸出培养液种细胞

作者: idealgas 时间: 2011-4-24 00:08

我们是直接取盖玻片用无水乙醇清洗，然后再过火，直接就铺在孔板里面，接种细胞之前可以用0.1%的明胶处理下。

作者: idealgas 时间: 2011-4-24 00:09

我们是直接取盖玻片用无水乙醇清洗，然后再过火，直接就铺在孔板里面，接种细胞之前可以用0.1%的明胶处理下。

作者: HMC 时间: 2011-4-24 08:37

我们是直接取盖玻片用无水乙醇清洗，然后用PBS洗涤3次，不用过火，直接就铺在孔板里面，接种细胞之前可以用0.1%的明胶处理下。

作者: arwen 时间: 2011-4-26 20:27

我们的是泡碱，泡酸，双蒸水浸泡过夜，灭菌，烘干，然后用多聚赖氨酸包被两个小时，PBS洗三遍，但细胞还总是死（种未分化细胞的时候还好，但如果种细胞后进行诱导，细胞就大量死亡），不知是怎么回事，求助……

作者: arwen 时间: 2011-4-26 20:29

忘了说了，如果把细胞直接种在细胞板上，细胞就不会死，可见那是玻片的问题，不知大家用的是什么样的玻片？我们这边的共聚焦显微镜只能看玻片，不能看细胞板，非做爬片不可

作者: zhaoyan1983 时间: 2011-5-3 10:55

是不是能直接看细胞板的就不用做爬片？我们实验室里好像没有人做爬片啊！做爬片和不做爬片效果有多大差别？

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