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标题: hESC conculture with op9 [打印本页]

作者: 大漠 时间: 2009-8-10 21:50 标题: hESC conculture with op9

hESC conculture with op9
我在做人的胚胎干与OP9细胞株共培养诱导造血分化，做了几次均失败，主要是培养到4-5天时OP9细胞状态就变得很差，直接导致分化克隆坏死脱落。原因不知道？细胞株均是从美国买回来的，方案也是按照文献上的报道做的。敬请各位有经验的师兄师姐给予指导。谢谢！

作者: 大漠 时间: 2009-8-25 23:50

和大家分享一下成功的喜悦。主要是培养基的问题，必须使用不含核糖核酸和脱氧核糖核酸的a-mem培养基，血清也要使用HYCLONE的特级血清。否则养出的op9细胞肯定用不了。我已经做成功了。

作者: xianchen 时间: 2009-11-24 13:01

楼主，你在北京吗？我想求你给一支OP9的细胞，我们实验室刚从ATCC买了一支，结果养得状态很不好。想跟你联系交流交流。

作者: wildspace 时间: 2009-11-27 17:55

回复 2# 大漠
/ u( C% P, u: ^

LZ你好，我们实验室近来在做这方面的实验，但是没有细胞株，能跟你们老板联系向他要一只细胞吗？你能跟我联系告诉我你是哪里的实验室吗？谢谢！

作者: 大漠 时间: 2009-12-6 21:30

不好意思，最近忙，没有上网。我有ATCCop9，状态不错。但是还是出现以前的问题，希望有高手提供点经验。我怀疑可能是HES细胞株的问题，但是，我手头只有一株细胞。楼上两位的HES细胞是哪个细胞株？我们可否交换？谢谢！

作者: 痞子的烟头 时间: 2009-12-8 12:29

我以前做过与OP9共培养诱导分化dendritic cell，前提是到CD34+，FACS检测效率很不错，时间太久，提几点意见。仅供参考5 m7 g4 c; X) W8 V; o D0 H
1. a-MEM 培养FBS至少20%
2. HES 接种时克隆要尽量大点
3. 一般共培养五天，重新接种，期间3天时，半量换液) K. h2 O2 r0 r- G I% D
4. 最要的是要保证OP9在做为FEEDER之前的状态；往HSC方向，最后肯定要漂的；

作者: 大漠 时间: 2009-12-8 15:09

版主，您好！你讲的注意事项我基本都注意到了。我的op9是才从ATCC买回来的。状态很好。a-MEM是现配现用。FBS一直用的都是20%。可就是op9只能维持3-5天，从第2天就看到状态变差，最后，细胞就完全脱落了。根本没有办法做下去，按照WILcell protocol应该可以维持到14-21天。所以实在没招了，才想到是否由于HES细胞株有影响。敢问斑竹用的是哪个细胞株？能否向您请教请教，我的QQ393064897.谢谢！

作者: 大漠 时间: 2009-12-11 17:40

[attach]3271[/attach]这是我培养的op9细胞。状态很好。由于实验需要，恕不免费赠送，若愿意，可以用hES交换。

作者: maz_2008 时间: 2010-1-7 14:46

学习了！！

作者: fengxuan 时间: 2010-2-5 00:44

学习

作者: llingzu 时间: 2010-2-5 08:06

学习了

作者: 痞子的烟头 时间: 2010-3-12 10:54

版主，您好！你讲的注意事项我基本都注意到了。我的op9是才从ATCC买回来的。状态很好。a-MEM是现配现用。FB .... Z$ E# k* m) v4 n9 Y
大漠发表于 2009-12-8 15:09

) i' O p6 t6 j5 g- t9 ]6 a7 x A

H9 AND H1

作者: shiningrain 时间: 2011-7-12 15:31

回复大漠的帖子6 h# N) E# t0 A/ h ~* p: X
# Z: C3 K, l7 m+ g# F: x
我养的OP9状态也还可以，用的MEMα+20%FBS，一般传代后第八天进行共培养，共培养的时候ES/iPS细胞都是贴壁生长的，没有漂起来，但没有文献上那么多典型的放射状的发亮的克隆，一般共培养第七或第八天做流式细胞术检测，CD34+细胞最多也就2%，一般才百分之零点几，想和楼主交流一下实验啊~~

作者: sdjjfangfang 时间: 2011-7-12 15:52

回复痞子的烟头的帖子
( |' t b9 K# h8 r+ g
请问（1）、OP9是处理后（照射或者是丝裂霉素处理）的吗？4 C1 [5 B0 q: }- q2 T
（2）共培养5天后重新接种会影响细胞的状态吗？是用胰酶消化还是把克隆划下来呢？谢谢！

作者: 123150075 时间: 2011-8-29 22:12

学习~~~

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