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标题: 第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒 [打印本页]

作者: 泡沫清风 时间: 2009-8-20 12:01 标题: 第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

本帖最后由泡沫清风于 2009-8-20 12:20 编辑 ) J; t0 ~5 |8 @; F
# q: Q6 @' c2 [0 _) a2 i$ L, M* ^
铺皿后19小时左右，观察细胞密度：
# N+ [$ @, h! o- B, U
) f9 F! {1 r/ g: b& P. F/ ?0 S
实验准备：  Y  ]! x7 `! X: n) q* J# {; n
1、培养基：DMEM+10%FBS
2、lipofectamine 2000 （invitrogen）5 W9 s# W6 O: n7 [* z" Q4 f
3、OPTI-MEM （GIBCO）4 f3 N+ i/ Z5 x3 e
4、质粒# l( b, ], B8 V2 P5 H
两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP
                     MSCV-IRES-GFP& a0 k0 u; f4 o$ ?( S" B8 v" p" x
两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG3 D+ S( q/ y5 S, s* E' R( @# f
2 m) o+ W8 D  ]
实验步骤：
1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。
2、制备质粒-lipo 2000混合液：
（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）0 Y  T  j! V8 a8 {
[attach]1981[/attach]* |3 j; W  Q- A- Z& \, ~: y
  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）
（b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）* u* z* k8 s# U- ]& Z& c
  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。（4个皿的量）5 ^; s! }& A! {6 P& F, Z- c! K
  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min% _- D9 \) {7 f1 Y* m
3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。( D2 {+ V0 o1 U" R0 C; j
4、放入温箱培养，到6小时时换液。

作者: 轩辕之客 时间: 2009-8-20 12:32

沙发！！！

作者: 细胞海洋 时间: 2009-8-20 13:01

图片很清晰，内容很详细，谢谢

作者: mvirus008 时间: 2009-8-20 14:38

see see

作者: john8707 时间: 2009-8-20 14:54

期待啊~

作者: biowx 时间: 2009-8-20 16:08

作者: hualin840518 时间: 2009-8-21 08:51

作者: cortex 时间: 2009-8-21 09:24

xiexie

作者: chenghoby 时间: 2009-8-22 00:10

老师辛苦了

作者: maz_2008 时间: 2009-8-22 08:21

作者: lingren 时间: 2009-8-22 10:20

HAO SEE SEE

作者: sajia 时间: 2009-8-23 13:45

1# 泡沫清风 ! d: z; ?5 h- `" Z |

0 K- K4 x" k7 @1 e- Q
看看小二

作者: scienese 时间: 2009-8-23 19:37

nice

作者: dxb1985 时间: 2009-8-23 22:39

Thank you very much

作者: dinghy 时间: 2009-8-24 17:21

太好了，看看

作者: jyuwang 时间: 2009-8-26 16:04

thx again!!!

作者: shiaiqin 时间: 2009-8-26 16:50

thank you

作者: dylm2000 时间: 2009-8-27 18:27

详细

作者: liuqd 时间: 2009-8-29 21:00

谢谢！~！！

作者: msc-ihs 时间: 2009-8-30 14:56

图文并茂，很好

作者: liqiong29 时间: 2009-8-31 18:04

看看怎么接种。。。

作者: baixiaodgv 时间: 2009-9-4 17:07

关注!

作者: water12006 时间: 2009-9-9 17:11

一路支持！

作者: joicie 时间: 2009-9-10 19:44

：）

作者: hawkinsbill 时间: 2009-9-14 10:17

看看，谢谢

作者: fengxuyang521 时间: 2009-9-16 10:48

作者: yzzjx 时间: 2009-9-17 17:12

作者: 翠晓灿阳 时间: 2009-9-17 20:04

谢谢

作者: fengqingrusi 时间: 2009-9-28 09:09

ding qi

作者: frank 时间: 2009-9-28 14:05

期待, [/ n5 s {$ ~# B8 N1 ~

1# 泡沫清风

作者: ruanyao57 时间: 2009-9-28 14:30

继续加油。

作者: didi817 时间: 2009-10-7 17:31

zhi chi ni , jia you 1# 泡沫清风

作者: 微微一笑 时间: 2009-10-13 15:52

学习！！！！！！！！！！！！！！！！

作者: 功夫猫 时间: 2009-10-15 10:49

跟踪学习

作者: 飞俞 时间: 2009-10-28 09:39

学习学习

作者: haonan_1985 时间: 2009-11-7 00:35

看看

作者: shaka74 时间: 2009-11-9 20:09

ding

作者: camel_stone 时间: 2009-11-11 21:10

好好学习一下。

作者: camel_stone 时间: 2009-11-11 21:12

图片很清晰，内容很详细，谢谢

作者: piaobott 时间: 2009-11-17 13:49

thanks

作者: papilio 时间: 2009-11-17 17:28

学习！

作者: jmm008 时间: 2009-11-18 15:41

作者: claudia00000 时间: 2009-11-18 16:34

提示: 作者被禁止或删除内容自动屏蔽

作者: 上海过客 时间: 2009-11-19 19:22

hao de

作者: c3024034 时间: 2009-11-23 15:10

学习】

作者: zengfang1102 时间: 2009-11-24 15:33

辛苦啊

作者: ziyunfei1982 时间: 2009-11-25 22:53

thanks

作者: jessica.jr 时间: 2009-11-26 17:39

谢谢

作者: zhangmingqi111 时间: 2009-11-27 21:19

机会难得继续学习

作者: hww22 时间: 2009-11-28 19:38

ding idn gidng idng

作者: lpzhdm 时间: 2009-12-1 13:12

继续了

作者: liangq465 时间: 2009-12-2 08:18

不错，谢谢分享

作者: pjthust 时间: 2009-12-6 19:16

学习下

作者: wensui 时间: 2009-12-7 17:14

继续中……[img][/img]

作者: 唐唐宝贝 时间: 2009-12-8 10:37

谢谢

作者: ghfvcat 时间: 2009-12-8 16:28

老师辛苦了

作者: franklinhg 时间: 2009-12-11 02:11

作者: may21thwlp 时间: 2009-12-14 13:22

thanks

作者: xwp198527 时间: 2010-1-9 16:22

勤奋学习

作者: slong 时间: 2010-1-11 09:44

呵呵

作者: tingtingliu82 时间: 2010-1-11 13:49

学习

作者: hndxws 时间: 2010-1-12 12:38

see see

作者: 仰望星空 时间: 2010-1-13 01:31

好好啊！我该这样学学！

作者: jayhaoli01 时间: 2010-1-14 11:06

see

作者: bobo10679888 时间: 2010-1-17 00:38

xiexie

作者: luoleihao 时间: 2010-1-19 00:29

进来一看~~

作者: baisuilan 时间: 2010-1-19 17:46

学习学习~~ 谢谢分享

作者: wky98 时间: 2010-1-19 21:41

thanks for sharing

作者: 旺旺 时间: 2010-1-21 16:47

受益匪浅

作者: 幻石 时间: 2010-1-21 22:06

学习学习了

作者: weichan08 时间: 2010-1-22 20:38

好！！

作者: liutianzhu 时间: 2010-1-25 10:43

作者: Elisa秦 时间: 2010-1-29 14:26

学习持续中。

作者: Elisa秦 时间: 2010-1-29 14:44

学习了。。。

作者: 蜗牛小白 时间: 2010-1-31 22:25

期待！

作者: 蜗牛小白 时间: 2010-1-31 22:31

回复 1# 泡沫清风 4 u1 j s9 C1 P( B

很不错！

作者: weichan08 时间: 2010-2-1 15:50

很好！值得学习！！

作者: chongke2010 时间: 2010-2-6 19:26

作者: 58062782 时间: 2010-2-21 10:27

Thank you for sharing

作者: weianh 时间: 2010-3-2 21:50

作者: yzc820215 时间: 2010-3-3 22:38

谢谢

作者: yidaba 时间: 2010-3-6 06:38

非常不错.学习了

作者: mmssyyee 时间: 2010-4-2 17:41

新培养液里含不含血清啊？

作者: lamprr 时间: 2010-4-6 21:07

继续学习

作者: misser217 时间: 2010-4-6 21:44

学习

作者: kouke80 时间: 2010-4-7 00:04

好贴，谢谢。

作者: 隆锦华 时间: 2010-4-7 00:48

宝宝,来吧

作者: stemcell8 时间: 2010-4-15 20:40

ggss

作者: angel-sakura 时间: 2010-4-20 23:56

来学习下~~~

作者: qgjin 时间: 2010-4-21 13:09

停不住的学习步伐。。。。。

作者: 王坤 时间: 2010-4-21 19:13

xuexue

作者: pingzing 时间: 2010-4-28 01:01

学习

作者: realinter 时间: 2010-4-28 09:50

作者: jianlindunev 时间: 2010-4-30 17:08

非常感谢

作者: ahfjwangrui 时间: 2010-5-4 11:27

呵呵，很好啊

作者: sky512829 时间: 2010-5-6 16:26

学习来了

作者: treestem 时间: 2010-5-7 13:29

学习一下啊

作者: fsc0126 时间: 2010-5-11 07:48

版主不知您是否有Kat 和 VSVG这两个辅助质粒？或者从哪可以购买？谢谢

作者: separatewolf 时间: 2010-5-12 23:19

图片很清晰，内容很详细，谢谢

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