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标题:
讨论去除PBMC中少量红细胞方法
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作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 09:49
标题:
讨论去除PBMC中少量红细胞方法
近期，提取的PBMC中含有少量红细胞，请问大家有什么好的方法去除红细胞，不影响白细胞活性和后续培养的。有好的红细胞裂解液也可以推荐。
作者:
王宏伟8901
时间:
2017-7-7 10:31
吸取白膜层的时候尽量慢慢吸取，不要吸到红细胞
作者:
翎宝
时间:
2017-7-7 11:17
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只因偶然
的帖子
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用裂解液后期长不起来的，用分离液再离一次试试，或者后期长起来后用注射用水裂解试试
作者:
wzs1985
时间:
2017-7-7 11:38
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只因偶然
的帖子
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试一试高渗与低渗的PBS，先用1.8x的PBS处理几分钟，再用等体积的2.2x的PBS中和，然后离心。处理时间以及回收率就需要用你的经验把握了。
作者:
rzghc
时间:
2017-7-7 13:26
先hes沉降后ficoll分离
作者:
拉二胡的拉尔夫
时间:
2017-7-7 14:06
1.上ficoll是用盐水充分稀释
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2.离心降速时减少震动。
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3.吸白膜层时要轻柔。
作者:
剡溪兰客
时间:
2017-7-7 14:10
再上一次ficoll即可
作者:
金鹏
时间:
2017-7-7 14:28
如果不是使用适合的分离液，并掌握好恰当的离心力和离心时间等，基本上都会有一点红细胞。要完全去除基本上只有用裂解的方法，裂解液或低渗的方法
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:25
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王宏伟8901
的帖子
3 _" {3 C& _3 j* w
: E0 H. h- U6 I3 m
红细胞跟白细胞混一起了
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:26
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翎宝
的帖子
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5 {4 w3 H" D) z; X( z S6 z, J3 s/ Y
所以问是否有好的红细胞裂解液
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:26
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wzs1985
的帖子
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- x* n0 l) n G2 u9 x
用过高渗和低渗，会影响后续培养
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:27
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rzghc
的帖子
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; }1 R, n( C/ k7 c
羟乙基溶液沉降太费时间了
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:27
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拉二胡的拉尔夫
的帖子
7 A4 w* y( A9 v) A+ T
( r; Z! U4 S3 P7 a
这点都是清楚的，跟操作无关
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:27
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剡溪兰客
的帖子
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4 V. h' T5 r5 e
试过，效果不明显
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:28
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金鹏
的帖子
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2 F& u% N0 A/ c" i! E* ~0 [
外周血的不会，主要是部分脐血会
作者:
金鹏
时间:
2017-7-8 09:09
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只因偶然
的帖子
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* b) t- j9 y7 s2 r. g" `
你用的是哪里的分离液咧，求推荐，我也试一试，我现在做的好像都一点
作者:
rzghc
时间:
2017-7-10 06:46
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只因偶然
的帖子
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是费点时间，不过效果还是不错的
作者:
jxsese
时间:
2017-7-10 16:02
我们一般都是用注射用水吹打，严格控制时间，大概可以去掉一半的红细胞，这是个人经验。
作者:
紫风铃9897
时间:
2017-7-10 18:31
rzghc 发表于 2017-7-7 13:26
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先hes沉降后ficoll分离
* i, S( q6 D! G; t- E
MARK先
作者:
淘知路遥
时间:
2017-7-12 10:01
做流式检测可以用。大都时候在白膜层很明显时，只取白膜层也会有少量红细胞，有些人白膜层本身就会混一点红细胞或者其他白色不溶物，少量红细胞不影响培养，个人不推荐用红细胞裂解液，国产比较出名的有天津灏洋、碧云天。
作者:
阿秀哥
时间:
2017-7-14 16:15
多少会有点红细胞混在一起的，如果不是太多就不用担心，不会影响细胞的后期生长。如果太多的话，可以用ficoll再离一次
作者:
ltickp
时间:
2017-8-2 16:27
TBD，破红后清洗两遍对后续的培养没什么大的影响
作者:
吕小松
时间:
2017-8-6 20:39
将白膜冻到-80℃ 48小时后再复苏，离心，红细胞都离出来了，而且不会多么影响白膜的质量
作者:
yanxm920
时间:
2017-8-7 14:31
在分离PBMC时，有时会带有少量红细胞，其实红细胞对后期细胞的生长影响很小，可以忽略不计的；如果实在是追求完美，就比学勇红细胞裂解液处理，比较好用的是红细胞裂解液，品牌：Solarbio | 货号：R1010，可以试着用一下，仅供参考！
作者:
聂晨飞
时间:
2017-8-10 17:03
建议用分离液再分离一次，裂解液虽然效果显著，但对细胞伤害较大。后期换液时候，低速离心，也有效果
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