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标题:
讨论去除PBMC中少量红细胞方法
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作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 09:49
标题:
讨论去除PBMC中少量红细胞方法
近期，提取的PBMC中含有少量红细胞，请问大家有什么好的方法去除红细胞，不影响白细胞活性和后续培养的。有好的红细胞裂解液也可以推荐。
作者:
王宏伟8901
时间:
2017-7-7 10:31
吸取白膜层的时候尽量慢慢吸取，不要吸到红细胞
作者:
翎宝
时间:
2017-7-7 11:17
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只因偶然
的帖子
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" g5 K/ Q' M9 n7 u+ A
用裂解液后期长不起来的，用分离液再离一次试试，或者后期长起来后用注射用水裂解试试
作者:
wzs1985
时间:
2017-7-7 11:38
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只因偶然
的帖子
7 Y- ?( e/ _. P# f. t! u
9 I- S% k' f" \5 s* `. `. G) J
试一试高渗与低渗的PBS，先用1.8x的PBS处理几分钟，再用等体积的2.2x的PBS中和，然后离心。处理时间以及回收率就需要用你的经验把握了。
作者:
rzghc
时间:
2017-7-7 13:26
先hes沉降后ficoll分离
作者:
拉二胡的拉尔夫
时间:
2017-7-7 14:06
1.上ficoll是用盐水充分稀释
! T+ `. E- F" N6 n1 x2 _
2.离心降速时减少震动。
$ a/ }. F1 `7 z, P' L
3.吸白膜层时要轻柔。
作者:
剡溪兰客
时间:
2017-7-7 14:10
再上一次ficoll即可
作者:
金鹏
时间:
2017-7-7 14:28
如果不是使用适合的分离液，并掌握好恰当的离心力和离心时间等，基本上都会有一点红细胞。要完全去除基本上只有用裂解的方法，裂解液或低渗的方法
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:25
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王宏伟8901
的帖子
8 I% X& N" g# t3 C& [ U
; X0 t' o# z; o- s% e( O6 m6 q
红细胞跟白细胞混一起了
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:26
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翎宝
的帖子
& p+ a" e8 D+ _. X- l
$ ]4 Y! n8 h( d
所以问是否有好的红细胞裂解液
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:26
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wzs1985
的帖子
5 s* D/ f* Y) l" y. c& {0 t2 n
6 }1 p; k( I& |8 a( O' X0 D9 G# h
用过高渗和低渗，会影响后续培养
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:27
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rzghc
的帖子
; _( U3 J* `' |2 o
2 @& t' H5 @5 s' {1 ?
羟乙基溶液沉降太费时间了
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:27
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拉二胡的拉尔夫
的帖子
% h/ ~# Z+ U3 L, z, Z F8 e" d4 c" u; ^4 V
& W, X s: u. q$ O& D7 A9 X0 [/ D
这点都是清楚的，跟操作无关
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:27
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剡溪兰客
的帖子
; H. s+ y) e+ |$ a5 S
1 o! t/ k @( C
试过，效果不明显
作者:
只因偶然
时间:
2017-7-7 16:28
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金鹏
的帖子
- a6 @) C& W6 ^2 \5 [, C$ O
7 f u0 i! K( W3 r) d# y
外周血的不会，主要是部分脐血会
作者:
金鹏
时间:
2017-7-8 09:09
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只因偶然
的帖子
1 g8 }& m1 Y& P- }1 o
. {! k5 ?/ b2 R( L* @' G
你用的是哪里的分离液咧，求推荐，我也试一试，我现在做的好像都一点
作者:
rzghc
时间:
2017-7-10 06:46
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只因偶然
的帖子
7 g$ c0 [( M$ E' T
& O. f' j& x' ~: O
是费点时间，不过效果还是不错的
作者:
jxsese
时间:
2017-7-10 16:02
我们一般都是用注射用水吹打，严格控制时间，大概可以去掉一半的红细胞，这是个人经验。
作者:
紫风铃9897
时间:
2017-7-10 18:31
rzghc 发表于 2017-7-7 13:26
, {( ^1 m* N3 i8 D) w1 k, V) u# n
先hes沉降后ficoll分离
0 h- T# p# Z4 T) ~, f
MARK先
作者:
淘知路遥
时间:
2017-7-12 10:01
做流式检测可以用。大都时候在白膜层很明显时，只取白膜层也会有少量红细胞，有些人白膜层本身就会混一点红细胞或者其他白色不溶物，少量红细胞不影响培养，个人不推荐用红细胞裂解液，国产比较出名的有天津灏洋、碧云天。
作者:
阿秀哥
时间:
2017-7-14 16:15
多少会有点红细胞混在一起的，如果不是太多就不用担心，不会影响细胞的后期生长。如果太多的话，可以用ficoll再离一次
作者:
ltickp
时间:
2017-8-2 16:27
TBD，破红后清洗两遍对后续的培养没什么大的影响
作者:
吕小松
时间:
2017-8-6 20:39
将白膜冻到-80℃ 48小时后再复苏，离心，红细胞都离出来了，而且不会多么影响白膜的质量
作者:
yanxm920
时间:
2017-8-7 14:31
在分离PBMC时，有时会带有少量红细胞，其实红细胞对后期细胞的生长影响很小，可以忽略不计的；如果实在是追求完美，就比学勇红细胞裂解液处理，比较好用的是红细胞裂解液，品牌：Solarbio | 货号：R1010，可以试着用一下，仅供参考！
作者:
聂晨飞
时间:
2017-8-10 17:03
建议用分离液再分离一次，裂解液虽然效果显著，但对细胞伤害较大。后期换液时候，低速离心，也有效果
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