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关于间充质干细胞表面的的黑点的问题
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作者:
gsg040222
时间:
2017-7-18 09:29
标题:
关于间充质干细胞表面的的黑点的问题
最近培养的干细胞在显微镜下观察，发现细胞表面粘附有将近20个黑点，并且这个黑点只在细胞表面，培养液中没有发现，在高倍镜下观察，黑点是不动的，还有就是细胞的伪足比我之前培养的细胞长将近⅓，还有就是观察细胞时，每个培养瓶中都有几个细胞团，这些细胞团是细胞核聚集在一起，甚至在低倍镜下观察都是亮亮的一团，伪足更长，其他细胞长得也比较稀疏，细胞扩增也比较慢，观察到这个问题是在原代传代后就有，也不扩增，但是传代后，过一天黑点的数量又成这么多，不增不减。用的培养瓶，不透气的瓶盖，传代终止用FBS，求原因啊，麻烦大家了。
作者:
rzghc
时间:
2017-7-18 10:35
检查下支原体污染
作者:
zuishui
时间:
2017-7-18 12:41
可能是分化了吧~你测过表型么？
作者:
淘知路遥
时间:
2017-7-18 14:12
应该是用的胎牛血清，导致细胞内杂质太多，有镜下观察过干细胞把黑色物质一点一点聚集往外吐，这样细胞容易老化
作者:
fenglinzhu
时间:
2017-7-18 17:10
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gsg040222
的帖子
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, l+ p3 M6 O* r7 h- s5 I/ }1 R& G- P
这应该是细胞质基质吧，有可能是细胞老化了，伪足长，生长缓慢，我觉得可能是有分化现象吧。不知道你用的是什么培养基，血清浓度是多少？胰酶浓度，及消化时间呢？
作者:
gsg040222
时间:
2017-7-19 09:14
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rzghc
的帖子
% j2 u% n; R( q3 L- E0 ?# c8 j
6 F% e. b+ \# l+ L6 y' p
做不了啊
作者:
gsg040222
时间:
2017-7-19 09:14
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zuishui
的帖子
0 J1 f. ]. X: E T" H
& v1 F- T4 z, h* I- j
没有测过
作者:
gsg040222
时间:
2017-7-19 09:15
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淘知路遥
的帖子
& \$ l3 \( V( \& {
, z' i1 d, \9 \, e
恩 好的，我再看看吧，麻烦您了
作者:
gsg040222
时间:
2017-7-19 09:16
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fenglinzhu
的帖子
' m; B5 J6 L9 f1 f$ C
9 s+ q7 R' x* m: \: t
用的是无血清培养基，消化胰酶浓度0.025，也觉得细胞形态有些不正常
作者:
fenglinzhu
时间:
2017-7-19 13:06
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gsg040222
的帖子
3 S% Z) ~# W7 m/ z4 Q
: `0 t( A& z \% j
无血清培养基的话是需要驯化的，不然的话细胞状态会很差
作者:
zuishui
时间:
2017-7-19 21:29
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fenglinzhu
的帖子
W$ h8 z3 E" H, N9 U/ L
! m1 @9 Q8 J. m1 b$ L5 A
什么是驯化？
作者:
fenglinzhu
时间:
2017-7-20 08:46
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zuishui
的帖子
7 s3 q s7 w& A* c2 u7 c; P
: O$ I6 v& `6 @: {- [# T" d- b
就是先用有血清的培养基培养，然后混合无血清培养基培养，减少血清用量，慢慢转换成无血清培养，这样细胞会比较好一点
作者:
阿秀哥
时间:
2017-7-20 14:05
从你描述的来看，很有可能是出现老化现象了
作者:
zuishui
时间:
2017-7-21 01:47
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fenglinzhu
的帖子
) S' c8 z. c" H6 X2 Z; A1 Q* V7 u
7 q) N* Y3 j, C9 ?5 ~8 k8 q
原来如此~
作者:
zuishui
时间:
2017-7-21 01:47
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阿秀哥
的帖子
) ]& ~* x* v9 l0 o
$ X: A4 ]6 C2 T, p- u
老化了是否可以提纯啊，还是会越养越老化？
作者:
fenglinzhu
时间:
2017-7-21 08:36
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zuishui
的帖子
' i6 l1 z$ s2 Z- H b4 J( s3 g
8 E$ J) V* b* f+ T. J% E) r# P
消化的时候不要把那种贴壁很牢的消化下来，老化的细胞一般贴壁都比较牢
作者:
yeshch
时间:
2017-7-21 11:35
首先，建议检测一下支原体，原代培养一定警惕支原体污染；其次，以前培养液中出现黑点也以为是污染，跟公司沟通之后发现培养基中蛋白物质含量不对也会析出黑点，所以建议查对一下你的培养基成分有没有问题；还有一个很小的可能就是老化的细胞中也容易出现黑点
作者:
阿秀哥
时间:
2017-7-24 10:25
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zuishui
的帖子
4 Y) } I1 f: f2 g6 B
- f3 e- z; e: w) C+ \7 ~$ Y
提纯没作用的了，只会越养越老
作者:
caoyu2
时间:
2017-7-27 14:49
学习一下
作者:
caoyu2
时间:
2017-7-27 14:49
学习一下
作者:
ltickp
时间:
2017-8-10 16:58
应该是MSC排出的，细胞和培养基里面应该也会有小黑点的，且是静止不动的，论坛上好几个帖子都有人说是胎牛血清造成的，我们这边养的MSC基本都用胎牛血清，黑点几乎都有，只是量多量少罢了，细胞团应该是死细胞聚集成的团块物质，漂浮透亮，可能是接种细胞活率较低或者细胞汇合度较高的原因
作者:
saner
时间:
2017-8-29 10:14
我养的也是这样，感觉脏脏的，几代都是这样，洗不掉，实验室的师姐和老师都不知道是什么
作者:
Amy1114
时间:
2017-8-31 15:08
本帖最后由 Amy1114 于 2017-8-31 15:12 编辑
" p) k L* G4 Q+ r' J
7 S2 r! v$ b S2 u* m
我们也遇到过这种情况！师姐说可能是“黑胶虫”。
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我们把MSC培养到第6、7代的时候有时会出现小黑点，观察黑点不运动（如果是细菌污染应该看得到细菌很快游动）。
8 W! o+ U+ W1 K! D
考虑是胎牛血清的原因：黑点可能是支原体，也可能是杂质蛋白。
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7 W6 K2 T# }! O; N+ ~
细菌污染：培养基变黄，变浑浊
4 c7 @5 C) p5 P( H) ^. z
支原体污染：培养基变黄，仍澄清
3 B. ^* g9 b7 d+ p8 u
杂质蛋白：培养基不变黄，澄清
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进一步确认就需要买试剂盒来鉴定了。
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U# X) ^- x# b7 [$ f
胎牛血清操作的时候注意：1.使用前56°C，30min灭活。2.不能剧烈摇晃。
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