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标题: 我的细胞哪里去了 [打印本页]
作者: 免疫与细胞    时间: 2017-8-23 18:09     标题: 我的细胞哪里去了

间充质干细胞培养，融合率达到70％后，消化传代。消化离心后，细胞不见了，细胞计数为0。但是在传代后半小时又逐渐有细胞出现的培养瓶中，这是怎么回事？
作者: 快来快来数一数    时间: 2017-8-23 21:34

本帖最后由 快来快来数一数 于 2017-8-23 21:35 编辑
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回复 免疫与细胞 的帖子8 X1 Y5 W( m% a7 l3 f1 [; \. u

' I# \; E! A4 a# t2 d- W& \离心后要吸出废液，加入培养基吹散使再悬浮，然后计数。你看看是不是忘了吹打了。另外如果密度低，是有可能在计数板的小格看不着细胞的，所以稀释倍数别太大。
作者: baby00000003    时间: 2017-8-23 21:35

太过稀释了吧？或者是计数仪参数没设定好？
作者: 理科小文艺    时间: 2017-8-24 07:59

按多大的比例传代？1：？传的？有可能是传代太稀了  K. |) H* [) w

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作者: gxbzjznn    时间: 2017-8-24 08:34

传的太稀了，容易长不起来，对细胞活力也有影响！
作者: 免疫与细胞    时间: 2017-8-24 09:01

回复 理科小文艺 的帖子# c& _* y9 \7 Y2 q5 V+ Q

1 a- G/ Y# }# R, S  L$ _# d9 |我还没传代呢，就是消化之后离心收集细胞，重悬进行细胞计数的时候，细胞没了，一会又出来了。
作者: 淘知路遥    时间: 2017-8-24 09:13

你这个问题描述的像悬疑片一样，细胞不见了又出来了，别人回答只能凭空想象。细胞再少计数时总能看到一两个吧，你这个操作是同以前一样，只是这次出现异常？计数是计数仪还是计数板
作者: 抱朴子    时间: 2017-8-24 11:03

重点检查计数设备有没有问题。
作者: 理科小文艺    时间: 2017-8-24 13:13

回复 免疫与细胞 的帖子
- K% X4 {9 k! s  ^. W& O! A
' y; X3 I0 y5 H' h2 P' ~0 ?ok，那你是如何判断你的细胞又出现了呢？你确定自己前后取的样是一个出处？找找自己操作环节的问题吧。& F9 e! R. h! a
作者: 免疫与细胞    时间: 2017-8-24 13:23

回复 理科小文艺 的帖子
: L' m! S& I. L( A; Y" |7 g
2 N/ F$ {: u0 m1 I8 s# E是这样，我在消化后收集细胞，细胞计数，血球分析仪计数为0，手动计数也没有看到细胞。因此就没有按照细胞数来接种，直接接种到2个培养瓶，显微镜下可以看到培养瓶中悬浮细胞。也有可能是细胞量太少，但是我消化的时候细胞很多，因此很困惑。
作者: 免疫与细胞    时间: 2017-8-24 13:24

回复 淘知路遥 的帖子+ G$ k* j3 A& L; m1 v
; o% V! E1 G0 \) V3 K7 f7 F* ?+ u
这个胰酶我第一次用，消化效果不好，十几分钟才有效果，但不至于把细胞都裂解掉吧，我又重新买了一瓶胰酶替代物，看看情况。
作者: 免疫与细胞    时间: 2017-8-24 13:24

回复 快来快来数一数 的帖子4 h" ~7 _" ?0 H) c; n
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明白了
作者: 随时准备下线    时间: 2017-8-24 15:23

这根本就不是个问题，因为你是仪器没操作好，你应该检查下显微镜视野或者细胞计数仪视野里是否有流动的液体或者细胞，没有就是仪器问题。
作者: 理科小文艺    时间: 2017-8-24 15:40

从多大底面积的瓶子中消化的，又是接种到多大底面积的瓶子中，这个比例比较重要。有可能是你消化终止液或者重悬液太多，取出的样本不具有计数意义导致的。只要后期瓶里细胞密度ok就行，太稀了容易长差。8 p4 G* {' G* j
作者: ltickp    时间: 2017-8-24 17:15

你计数时是不是取错样本了，按理来说，计数工具经常用的话，血球计数板即便沉淀没拍散也不至于看不到一个细胞啊，细胞计数仪计数的话，也是有很低的浓度显示的
作者: ltickp    时间: 2017-8-24 17:16

你计数时是不是取错样本了，按理来说，计数工具经常用的话，血球计数板即便沉淀没拍散也不至于看不到一个细胞啊，细胞计数仪计数的话，也是有很低的浓度显示的
作者: 免疫与细胞    时间: 2017-8-25 08:37

回复 随时准备下线 的帖子
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9 K' C* L; l* ^+ `$ V& A谢谢，我今天再试一次，晚一点向大家报告。我新买了一瓶胰酶
作者: 淘知路遥    时间: 2017-8-25 08:44

胰酶室温或放37℃预热一下，消化时间控制2-3min
作者: 免疫与细胞    时间: 2017-8-25 08:58

本帖最后由 免疫与细胞 于 2017-8-25 08:58 编辑 6 R2 N1 N' j' F* ]! V

* M4 Z  t4 d+ s# i回复 淘知路遥 的帖子
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好的，先谢谢，昨天操作时胰酶消化效果不好，消化了十几分钟，估计这是问题的关键。
作者: vicky406285822    时间: 2017-10-10 13:53

刚好你计数的那部分没有细胞，应该是你没有混匀，既然一个也没有，这几率得多小呀！
作者: 2357710447    时间: 2017-10-10 15:25

1  可能是你重悬计数的环节出现问题    重悬细胞要吹散均匀     吹打次数不要太少     4 ^# I- m5 |/ v, o: Q7 B
2  细胞计数仪的问题   参数调整是否正确  操作是否正确
- _5 A  }9 U4 Q9 c' U; i3  取出来计数的细胞时间不要放太长时间（计数时要用吹打几下）   时间太长细胞沉淀    取样取到表面   自然也就看不到
作者: wmch666    时间: 2017-10-12 09:36

你是消化之后就计数的吗？是不是没消化好啊，你看看之前用的培养瓶里还有没有没消化下来的细胞。



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