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标题: 小鼠囊胚细胞差异染色方法 [打印本页]

作者: 大猪小猪落玉盘 时间: 2009-9-25 13:11 标题: 小鼠囊胚细胞差异染色方法

本帖最后由细胞海洋于 2011-11-16 01:18 编辑

希望大家一起进步[attach]2316[/attach]

作者: 抹茶跑跑 时间: 2009-9-25 20:22

感谢版主的无私分享

作者: 抹茶跑跑 时间: 2009-9-25 21:01

本帖最后由抹茶跑跑于 2009-9-25 21:07 编辑 + f& ~: [4 w% L' e E: K8 P7 F

有一个疑问，豚鼠补体（sigma）是冻干粉2 N: A7 S% f2 n$ p: }0 s. d
“1:10 稀释的豚鼠补体(guinea pig complement) :将1 份体积豚鼠补体和9 份0.1% PVA 的PBS相混合”
这里提到的一份体积豚鼠补体，是指冻干粉溶解之后配成的液体吗，豚鼠补体冻干粉标明的是5ml装，冻干粉不是mg而是ml吗？是指要先用5ml液体把冻干粉配成5ml豚鼠补体溶液？
那么冻干粉是用什么溶解呢

冻干粉是怎么配的，一份体积指的是什么，有点糊涂

作者: 大猪小猪落玉盘 时间: 2009-9-26 10:19

你说得很对，是要首先配成溶液。我记得我是用PBS稀释的，但我现在不能确定。我记得当时我是按照说明书配的。如果你购买了试剂，应该有说明书，上面一定会告诉你怎么配成溶液的。另附一张我自己做的图片。另外，再给你几篇相关的文章，有论文也有方法，你自己多参考，祝你实验顺利！
[attach]2350[/attach]8 {9 w4 s: z( g
: R) i' f9 m4 a, P- G

作者: 抹茶跑跑 时间: 2009-9-26 12:25

本帖最后由抹茶跑跑于 2009-9-26 12:26 编辑 1 t7 `! t b& D# m

many thanks

作者: 抹茶跑跑 时间: 2009-9-26 20:10

本帖最后由抹茶跑跑于 2009-9-26 20:13 编辑 $ i- k* I. y, Y9 m# [

之前查过豚鼠补体的说明书（sigma），但是没有找到具体的配置方法，请高手帮忙看下，谢谢

作者: 抹茶跑跑 时间: 2009-9-26 20:37

本帖最后由抹茶跑跑于 2009-9-26 21:06 编辑

看了版主的文献，很有帮助
还有些细节，没有找到答案
1.0.5%的链霉蛋白酶，PBS配置后过滤分装
配液用的PBS，是调好的PBS直接可以用，还是需要用灭菌PBS，配好备用的PVA-PBS还需要灭菌再用吗；过滤分装的具体操作是什么样的，0.22微米的滤器过滤吗？; H1 \7 r, C6 I

2.胚胎放入抗血清中作用后，用于终止抗体反应的10%血清的PVA-PBS，是指10%豚鼠补体吗？PVA-PBS洗涤后，再次放入含PI、Hoechest33342的豚鼠补体中吗？! ~: o2 m# V) ` X% Y2 G8 o1 Z
2 q. K" Q# C4 ^3 g% s
谢谢前辈的回答

作者: 大猪小猪落玉盘 时间: 2009-9-26 21:18

我看用超纯水就可以。祝顺利！

作者: 大猪小猪落玉盘 时间: 2009-9-26 21:33

对于第一个问题，最好灭菌处理（自己买盐配的），如果是买的PBS粉末自己配的，过滤器过滤就可以了。不管怎么样，就是保证你实验不受影响就好了。（不灭菌或者过滤也行，一般操作可以，但你是配置溶液，为了长期保存，还是越严格越好）。如果自己实验室没有0.5%的链霉蛋白酶，自己查资料，用实验室的常用盐，自己配个酸性台氏液也可以。但自己要掌握消化透明带的时间。
第二个问题：可以不用血清终止反应。但要多洗几遍。但不是用补体。' {+ w9 y% G9 Y E0 n
最后一步，可以把两种燃料混入补体中，一起作用。也可以跟补体分开作用。也有人先用PI同补体一起混着用，然后再单独用H33342作用5分钟。以我个人经验，几种方法都可以。

作者: 张也行 时间: 2009-9-27 00:42

谢谢各位前辈！

作者: wenwen629 时间: 2009-9-27 10:15

4# 大猪小猪落玉盘
辛苦了，谢谢！

作者: qizhi502 时间: 2009-10-31 22:02

有收获

作者: qq007006 时间: 2009-11-6 00:56

谢谢LZ的无私奉献

作者: kiesheep 时间: 2010-3-26 22:28

谢谢楼主

作者: tgy0119 时间: 2010-3-30 09:37

图真漂亮

作者: AslanHE 时间: 2010-3-30 23:11

i want to see it!

作者: ljhappy168 时间: 2010-3-31 13:49

顶楼主感谢分享

作者: shinron 时间: 2010-3-31 14:04

谢谢

作者: ppcl2 时间: 2010-4-4 13:13

kankan!!1

作者: ymxing2005 时间: 2010-4-9 15:23

我是新手

作者: ymxing2005 时间: 2010-4-9 15:27

各位前辈好，如果用甲醛固定后的囊胚可以用这种方式进行差异染色吗？

作者: tianmu20009 时间: 2010-4-16 13:35

谢谢！

作者: anminleiryan 时间: 2010-4-18 20:47

回复 1# 大猪小猪落玉盘

回复别人的帖子，是一种尊重，也是一种美德，希望大家多多支持发贴的研究员

作者: wxl87 时间: 2010-5-15 11:13

学习，使用h33342染的吗？

作者: elainecn 时间: 2010-5-28 14:59

xiang kankan

作者: leestone 时间: 2010-5-31 22:55

感謝分享

作者: wky98 时间: 2010-6-7 23:31

感谢

作者: hcluo 时间: 2010-6-8 22:46

感谢

作者: a530maxiaofei 时间: 2010-6-13 11:03

thanks

作者: w1986725 时间: 2010-6-17 15:11

我用的是直接将囊胚用PI与Hocchest染，分别用PI培养箱染35-50s，Hocchest染2h左右，几次得到的结果很有趣，一开始，是Hocchest染上了，后来换了PI，又是PI染上而无Hocchest，分析可能是由于Hocchest冷冻造成药品失效，目前正在实验中

作者: lfl-01 时间: 2010-6-24 10:41

多谢

作者: Ethanlu 时间: 2010-7-25 15:17

thank you ever so much

作者: xiongliangxl 时间: 2010-8-3 23:19

遇到了类似的染色问题，学习下

作者: melodyo 时间: 2010-8-11 13:56

我们一起进步，干细胞的路还很长

作者: elainecn 时间: 2010-9-13 14:49

借鉴下

作者: lwq0351 时间: 2010-9-20 22:07

看看

作者: sunyucheng 时间: 2010-9-23 21:05

学习

作者: liuxiaohua618 时间: 2010-10-10 00:05

想看看

作者: hyy00 时间: 2010-10-22 00:51

谢谢

作者: 鹤顶宏 时间: 2010-10-23 22:04

kan kan

作者: exin11 时间: 2010-10-23 22:58

来看看

作者: 天地之间 时间: 2010-11-8 17:26

看一下

作者: ymxing2005 时间: 2010-11-11 22:40

回复 6# 抹茶跑跑 ) x4 i1 b1 \! X7 F

你好，你的豚鼠补体是怎么稀释的？急啊。能分享一下么。

作者: ymxing2005 时间: 2010-11-11 22:42

有一个疑问，豚鼠补体（sigma）是冻干粉" y; Z# @# ?# _7 Q. j7 c
“1:10 稀释的豚鼠补体(guinea pig complement) :将1 份体积豚鼠补 ...
3 I9 E: `/ [6 z) P抹茶跑跑发表于 2009-9-25 21:01

; G) T" P7 e R6 Z1 f7 z* M& c( u6 T
) b3 S1 w! M: ]6 R; ?: d5 |

你好，你的豚鼠补体是用什么稀释的？效果怎么样？我现在也在做，遇到和你一样的问题，能告诉我一下么？谢谢！

作者: zerollx 时间: 2010-12-19 20:22

kan kan

作者: ambassador 时间: 2010-12-20 10:53

感谢老师分享！

作者: baixueyao029 时间: 2011-1-8 22:49

看看

作者: snowwolf111 时间: 2011-1-9 23:27

学习

作者: mahong_ok 时间: 2011-1-10 09:18

谢谢

作者: yaranrise 时间: 2011-2-20 21:05

谢谢楼主

作者: BenHantun 时间: 2011-2-24 09:14

支持& U g. G+ }4 x5 ~+ |; b

作者: sadhappy 时间: 2011-3-1 20:43

我正在做这个不知道详细吗

作者: 461650833 时间: 2011-3-1 22:04

顶楼主 ]2 j( x5 _ F$ e( o5 {
好帖子

作者: fantafiction 时间: 2011-3-3 17:34

xiexie

作者: fyssgfyssg 时间: 2011-3-8 19:40

看看 ~

作者: 空明 时间: 2011-3-21 21:02

学习

作者: wubihappy 时间: 2011-3-23 13:21

学习~~

作者: leftdance 时间: 2011-3-26 13:00

.....

作者: a2782953 时间: 2011-3-26 13:09

我看下，谢谢咯！

作者: 海星儿 时间: 2011-4-14 19:08

谢谢

作者: 死神的如心 时间: 2011-4-28 12:01

需要参考

作者: 死神的如心 时间: 2011-4-28 12:26

回复抹茶跑跑的帖子 A7 |! M4 i$ g' C d
" O. p9 `) l* s b5 b; E9 ?4 P
我看过的文献是说用0.45微米的过滤器过滤

作者: 鹤顶宏 时间: 2011-5-2 19:21

过几天就能自己做了

作者: xiangchou812 时间: 2011-5-20 15:25

学习一下

作者: pctcc 时间: 2011-6-7 11:18

谢谢楼主分享！！！

作者: biaocold 时间: 2011-6-7 11:42

many thanks

作者: huangcong1988 时间: 2011-6-7 22:31

nice

作者: POPOLD 时间: 2011-6-9 22:33

第三代从v是地产商的

作者: POPOLD 时间: 2011-6-9 22:34

没下载下来

作者: gqs2872022 时间: 2011-7-11 09:40

看看

作者: echowdk 时间: 2011-9-28 16:21

作者: gvbd 时间: 2011-9-28 22:16

我想学习一下

作者: 一江秋 时间: 2011-11-15 13:59

不错，谢谢

作者: yangpan521 时间: 2011-11-15 14:17

看看

作者: 夜之眷属 时间: 2011-11-15 18:44

谢谢楼主分享！！！！！！！

作者: sharkbaozi 时间: 2012-12-10 09:58

谢谢楼主分享6 ~3 K p* f+ D; [" {* o8 m, n

作者: ailuomansi 时间: 2012-12-30 23:27

let me see

作者: zdf1127 时间: 2015-5-19 09:49

小鼠囊胚细胞差异染色方学习一下！

作者: fubohao81 时间: 2016-4-14 10:02

多谢楼主分享

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