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标题:
请教关于脐带组织贴壁法，如何提高原代细胞的数量。
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作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 09:20
标题:
请教关于脐带组织贴壁法，如何提高原代细胞的数量。
请教问题1：脐带组织撕剪，请教取华通氏胶的正确位置（附上脐带展开面）
) b+ I" T; D( O! o( ^
请教问题2：脐带组织撕剪的大小，多大为合适？
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图片附件: [脐带展开面]
IMG_0847.JPG
(2017-11-15 09:16, 1000.18 KB) / 下载次数 635
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=OTAwMDd8MjhiNGE3ODF8MTc4NTcxMzY2Mnww
作者:
rzghc
时间:
2017-11-15 09:31
剥掉1条静脉2条动脉，表皮不破就行
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 09:57
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rzghc
的帖子
; w$ s; u1 C( {6 T. u8 E" M
5 l' I7 I9 Y2 G) c
您的意思是，表皮一起剪？
作者:
santry
时间:
2017-11-15 10:14
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yangzeqian
的帖子
3 O% @& Z0 @9 V
h6 G0 o4 k' P. _6 f
他的意思是去掉静脉腔和两条动脉，然后撕华通氏胶，只要没有把表皮撕破，撕下来的都可以用
作者:
santry
时间:
2017-11-15 10:19
大小的话尽量建成1mm*1mm的，不过稍微大一点也没事，都会有细胞爬出来，就是时间快慢的问题了，还有脐带尽量去掉血细胞，血细胞一多对于间充干的生长影响也是挺大了
作者:
YOCON
时间:
2017-11-15 10:20
我们这直接连皮一起处理也可以；
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 10:21
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santry
的帖子
3 V0 x2 P( P/ X) x4 [
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试验过2次完整实验，第一次是去掉静动脉连表皮羊膜带华通氏胶一起剪贴壁，效果优第二次是剥离了静动脉、表皮羊膜只取华通氏胶，效果良。
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 10:26
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YOCON
的帖子
2 ~1 K/ |9 U$ d. y; {
- a/ e2 W/ a. X/ F# Q, v& k
带羊膜表皮一起处理，我也试验过，效果还是不错的
! e; l: R4 \: ]3 }% S4 a, D3 Q
作者:
santry
时间:
2017-11-15 10:29
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yangzeqian
的帖子
. ]9 G/ ~5 y8 w" ^# i# |5 v4 x) x. o
9 X& a% ]0 j* d7 X
不知道您的效果是以什么为依据的，一般来说连同表皮一起贴壁的话会有上皮细胞爬出来，对于间充干生长是不利的
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 10:34
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santry
的帖子
- @* k: e6 v# y, Z" T* F
+ ?* |3 n! q, G% Q* O" \' B
P1细胞爬出来的数量和传代率，以及活性状态。
作者:
santry
时间:
2017-11-15 10:44
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yangzeqian
的帖子
+ h; D7 Y H* J6 ~2 {8 M# G& }
1 H( V7 Q; r0 i& E& I/ H' y
这倒是个不错的数据，我也做过好几次平行试验，一份脐带种两瓶，一瓶贴撕下来剪碎的华通氏胶，一瓶贴不撕直接剪的脐带组织，结果后者都会有一定程度的上皮细胞爬出来，对于传代时候的消化程度、间充干收集量以及传代完后的细胞状态都有影响。
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 11:42
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santry
的帖子
( A1 n6 f! K. I: z6 I2 y- ?& o; y) V4 z; k
0 u) d; ~6 _; O& Q! ~
不知道是否试剂的影响，带羊膜贴壁上皮细胞在我的实验中爬出来的几率很小。间充质会在大约9-10天这个特定的时间段集中爬出迅速增值，实验传代也没有问题，很稳定。最近实验室让只取华通氏胶进行贴壁，细胞的状态以及爬出的时间反而不如以前。
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 11:43
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santry
的帖子
( G# ?+ Z5 q2 S' u2 W. w0 b
4 I _( p( Z1 E9 @, K
这个是。感谢回复
9 j' j( K9 \3 V7 @
作者:
yqw1996
时间:
2017-11-15 13:08
学习了 正好最近才看了这方面资料
作者:
yanxm920
时间:
2017-11-15 14:48
1、剥离脐带的1根静脉和2根动脉后，撕扯华通氏胶；脐带的表皮（也叫羊膜）一定要除掉，否则细胞不纯；
5 `2 W! u* l; f
2、华通氏胶撕下来后，用剪刀剪脐带组织剪成1-3mm3大小，用少量培养基贴壁培养。
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-16 12:19
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yqw1996
的帖子
; h: S5 N2 x5 B$ Z3 d! u0 |
3 X5 b( s/ ?& a
有时间可以多探讨
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-16 12:22
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yanxm920
的帖子
m$ b( [1 K8 @5 V1 v, P8 M% [6 Z
4 t( k' O7 H4 z+ G$ d# C8 }$ q
恩，感谢解答。
作者:
fenglinzhu
时间:
2017-11-28 09:18
所有的对照试验都要控制好变量才有意义，你是不是用的同一根脐带做的对照试验？甚至再严谨一点，应该用同一根脐带的同一部位去做这个对照。因为不同脐带之间，同一脐带的不同部位之间，细胞的含量还是有一定区别的。据我的经验，去不去除表皮对细胞爬出速度影响不大，不去除表皮的话细胞纯度相对会低一点。
作者:
免疫与细胞
时间:
2017-11-30 10:13
怎么样了？方法我有，就是没做过，请教讨论啊
作者:
数盲飞飞
时间:
2017-12-1 09:56
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yangzeqian
的帖子
& `1 p C6 J* d' z1 G
3 w5 k E) N$ ~" |" }
不能光看细胞要数量，带羊膜会有上皮细胞长出来，而且上皮细胞生长速度要快于间充质，你可以把之前做出来的细胞做一个流氏分析，就知道了。
作者:
jxydiandian
时间:
2018-1-4 14:51
你羊膜撕了么，羊膜撕了的话，比较容易剪碎，细胞更容易爬出来，另外，细胞爬出来后，组织块可二次贴壁继续培养，仍然有细胞爬出来的，这样收集到的细胞量就大了
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