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标题:
请教关于脐带组织贴壁法，如何提高原代细胞的数量。
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作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 09:20
标题:
请教关于脐带组织贴壁法，如何提高原代细胞的数量。
请教问题1：脐带组织撕剪，请教取华通氏胶的正确位置（附上脐带展开面）
" P4 B* t" E. Y I4 Z
请教问题2：脐带组织撕剪的大小，多大为合适？
5 C! t6 c: m9 M
图片附件: [脐带展开面]
IMG_0847.JPG
(2017-11-15 09:16, 1000.18 KB) / 下载次数 716
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=OTAwMDd8NDc4YzE1NmV8MTc5MzIyNTMxNnww
作者:
rzghc
时间:
2017-11-15 09:31
剥掉1条静脉2条动脉，表皮不破就行
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 09:57
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rzghc
的帖子
& m& J$ L! i' ~' \9 @# A
* `5 v8 a' y# a$ q: ? s$ U/ Y
您的意思是，表皮一起剪？
作者:
santry
时间:
2017-11-15 10:14
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yangzeqian
的帖子
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# n( l, K" K" I: J7 Y7 t7 ?& B
他的意思是去掉静脉腔和两条动脉，然后撕华通氏胶，只要没有把表皮撕破，撕下来的都可以用
作者:
santry
时间:
2017-11-15 10:19
大小的话尽量建成1mm*1mm的，不过稍微大一点也没事，都会有细胞爬出来，就是时间快慢的问题了，还有脐带尽量去掉血细胞，血细胞一多对于间充干的生长影响也是挺大了
作者:
YOCON
时间:
2017-11-15 10:20
我们这直接连皮一起处理也可以；
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 10:21
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santry
的帖子
5 F% B+ A/ G1 m; G+ Z2 z
$ H4 S) M" k+ O+ c
试验过2次完整实验，第一次是去掉静动脉连表皮羊膜带华通氏胶一起剪贴壁，效果优第二次是剥离了静动脉、表皮羊膜只取华通氏胶，效果良。
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 10:26
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YOCON
的帖子
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- ]2 w4 u. X g$ g$ Q2 N4 {
带羊膜表皮一起处理，我也试验过，效果还是不错的
) C ^* H f. ]$ F* ]; v$ \
作者:
santry
时间:
2017-11-15 10:29
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yangzeqian
的帖子
! ]0 w; h6 L) t$ Y; P
8 h+ _" ]' }' Z
不知道您的效果是以什么为依据的，一般来说连同表皮一起贴壁的话会有上皮细胞爬出来，对于间充干生长是不利的
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 10:34
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santry
的帖子
- T8 _) ]6 e4 j0 A- J2 V0 d
& ]+ x% g% n6 b; d, W! o2 j ~
P1细胞爬出来的数量和传代率，以及活性状态。
作者:
santry
时间:
2017-11-15 10:44
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yangzeqian
的帖子
: O" M) s1 s C4 j7 P. h
, S- J3 h' H: U! s8 K
这倒是个不错的数据，我也做过好几次平行试验，一份脐带种两瓶，一瓶贴撕下来剪碎的华通氏胶，一瓶贴不撕直接剪的脐带组织，结果后者都会有一定程度的上皮细胞爬出来，对于传代时候的消化程度、间充干收集量以及传代完后的细胞状态都有影响。
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 11:42
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santry
的帖子
+ H9 E7 {/ q9 X/ ~) t
! u# D- T! q- g( R8 K9 [. A
不知道是否试剂的影响，带羊膜贴壁上皮细胞在我的实验中爬出来的几率很小。间充质会在大约9-10天这个特定的时间段集中爬出迅速增值，实验传代也没有问题，很稳定。最近实验室让只取华通氏胶进行贴壁，细胞的状态以及爬出的时间反而不如以前。
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-15 11:43
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santry
的帖子
+ C. D- [; l, A- A1 [3 F9 ~
5 H, {% W1 f$ }. y% R
这个是。感谢回复
$ J$ g( Y" F9 j1 U3 g% K
作者:
yqw1996
时间:
2017-11-15 13:08
学习了 正好最近才看了这方面资料
作者:
yanxm920
时间:
2017-11-15 14:48
1、剥离脐带的1根静脉和2根动脉后，撕扯华通氏胶；脐带的表皮（也叫羊膜）一定要除掉，否则细胞不纯；
; V1 N& S" R( x, ?5 d0 x+ q
2、华通氏胶撕下来后，用剪刀剪脐带组织剪成1-3mm3大小，用少量培养基贴壁培养。
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-16 12:19
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yqw1996
的帖子
/ I! j" F1 b3 p, Y4 `/ o
! y3 r, [" z3 M1 S s- }
有时间可以多探讨
作者:
yangzeqian
时间:
2017-11-16 12:22
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yanxm920
的帖子
0 W9 h# l$ `" N5 C8 T% S
( M l D7 z0 @, {1 ~
恩，感谢解答。
作者:
fenglinzhu
时间:
2017-11-28 09:18
所有的对照试验都要控制好变量才有意义，你是不是用的同一根脐带做的对照试验？甚至再严谨一点，应该用同一根脐带的同一部位去做这个对照。因为不同脐带之间，同一脐带的不同部位之间，细胞的含量还是有一定区别的。据我的经验，去不去除表皮对细胞爬出速度影响不大，不去除表皮的话细胞纯度相对会低一点。
作者:
免疫与细胞
时间:
2017-11-30 10:13
怎么样了？方法我有，就是没做过，请教讨论啊
作者:
数盲飞飞
时间:
2017-12-1 09:56
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yangzeqian
的帖子
% I( @+ A" O+ F) x0 h3 z
8 n$ q' E! t/ T6 C& N8 m& ?, Z& Y
不能光看细胞要数量，带羊膜会有上皮细胞长出来，而且上皮细胞生长速度要快于间充质，你可以把之前做出来的细胞做一个流氏分析，就知道了。
作者:
jxydiandian
时间:
2018-1-4 14:51
你羊膜撕了么，羊膜撕了的话，比较容易剪碎，细胞更容易爬出来，另外，细胞爬出来后，组织块可二次贴壁继续培养，仍然有细胞爬出来的，这样收集到的细胞量就大了
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